Wilson病・Menkes病銅輸送ATPaseの組織・細胞内局在の検討

威尔逊病/门克斯病铜转运 ATP 酶的组织/亚细胞定位检查

• 批准号: 09770582
• 负责人: 山口 之利
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770582/
• 关键词: Wilson病; Menkes病; 銅輸送ATPase

一昨年、前年に引き続き、ヒトWilson病お呼びMenkes病の遺伝子を用いて、蛋白を合成し、それに対するポリクローナル抗体を作製、精製した。今回もこのポリクローナル抗体をさらにProtein A beadsにてIgG cutし、さらに抗体を作製したもとの蛋白を用いたaffinity purificationを行い、より特異度の高い抗体を作製した。同様の抗体にて今回は患者および正常コントロール肝組織に対して、immunohistochemistryを行った。Wilson病の肝組織は現在までに3検体、正常コントロール肝(他疾患にて死亡(剖検)あるいは生検を行って得られた)は2検体である。Wilson病肝組織ではWilson病蛋白に対するポリクローナル抗体の組織内局在は認められなかった。ただし一部の検体ではすでに肝硬変による肝実質細胞の繊維化が激しく、比較しにくい例もあった。正常コントロール肝組織における局在はほぼ培養細胞と同様、Golgi-endosomeと思われる部位にシグナルを認めたがBack ground signalが強く、特異性に一部欠けるものであり、また胆管周囲での局在い対しても安定した結果が得られず現在も検討中である。対策として特異性の高いCY-3などの2次抗体を用いて再検討していく。また発症前型Wilson病(家族内検索にて診断、肝生検を行った症例)の肝組織が、最近得られ現在検討中である。これにより肝繊維化があまり進んでいない例での詳細な検討が可能となり、局在の比較コントロールとして有用と考えられる。今後も検討を続けたい。

YiZuo year and the year before に lead き 続 き, ヒ ト お Wilson disease called び Menkes disease の heritage 伝 son を with い し を て, protein synthesis, そ れ に す seaborne る ポ リ ク ロ ー ナ を ル antibody system, refined し た. Today back to も こ の ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody を さ ら に Protein A beads に て IgG cut し, さ ら に antibody を cropping し た も と の Protein を with い た affinity purification を い, よ り し the high degree of specific の い antibody を cropping た. With others in の antibody に て today back は patients お よ び normal コ ン ト ロ ー ル liver tissue に し seaborne て, immunohistochemistry を line っ た. Wilson disease の liver tissue は now ま で に 3 検 body, normal コ ン ト ロ ー ル liver (he disorders に て death 検 (3-d) あ る い は raw 検 を line っ て must ら れ た) は 2 検 body で あ る. Wilson disease of liver tissue で は Wilson disease protein に す seaborne る ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody の organization inside bureau at は め ら れ な か っ た. た だ し a の 検 body で は す で に liver hard - に よ る liver be stromal cells の 繊 dimensions が excitation し く, comparative し に く い example も あ っ た. Normal コ ン ト ロ ー ル liver tissue に お け る bureau in は ほ ぼ culture cell と with others, the Golgi - endosome と think わ れ る parts に シ グ ナ ル を recognize め た が Back ground Strong signal が く, specificity に a owe け る も の で あ り, ま た bile duct weeks 囲 で の bureau in い し seaborne て も settle し た results ら が れ ず now も 検 beg in で あ る. To counter と て specific <s:1> high <s:1> <s:1> CY-3な <s:1> secondary antibodies を use <s:1> て re-検 to attack て て く く く. ま た 発 disease before Wilson disease (within the family 検 cable に て diagnosis and hepatic 検 を line っ た cases) の liver tissue が, recently ら れ now beg in 検 で あ る. こ れ に よ り liver 繊 dimensions が あ ま り into ん で い な い example で の detailed な may beg が 検 と な り, bureau in の コ ン ト ロ ー ル と し て useful と exam え ら れ る. In the future, 検 検 will discuss を続けた 検.

项目成果

山口之利: "Wilson病およびMenkes病の遺伝子異常と病因" 小児科. 37. 817-824 (1996)

Yutoshi Yamaguchi：“威尔逊病和门克斯病的遗传异常和发病机制”《儿科学》37. 817-824 (1996)。

Hung IH: "Biochemical characterization of the Wilson disease protein and functional expression in the yeast Saccharomyces cerevisial" J.Biol Chem.272. 21461-21466 (1997)

Hung IH：“威尔逊病蛋白的生化特征及其在酿酒酵母中的功能表达”J.Biol Chem.272。

Yamaguchi Y: "Biochemical characterization and intracellular locabization of the Menkes disease ATPase" Proc. Natl.Acad.Sci. USA. 93. 14030-14035 (1996)

Yamaguchi Y：“门克斯病 ATP 酶的生化特征和细胞内定位”Proc。

山口之利: "先天性銅代謝異常症におけるP-type ATPase relating copper transporterの細胞内局在に関する研究" Biomed Res Trace Elements. 7. 141-142 (1996)

Yutoshi Yamaguchi：“先天性铜代谢障碍中与铜转运蛋白相关的 P 型 ATP 酶的细胞内定位研究”Biomed Res Trace Elements。7. 141-142 (1996)。

Yamaguchi Y: "Biochemical characterization and intracellular localization of the Menkes disease ATPase." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 14030-14035 (1996)

Yamaguchi Y：“门克斯病 ATP 酶的生化特征和细胞内定位。”