サブトラクションクローニング法によるNIDDM発症遺伝子の解析

使用消减克隆法分析 NIDDM 发病基因

• 批准号: 08770818
• 负责人: 倭 英司
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770818/
• 关键词: 糖尿病; PCR; サブトラクション法; 遺伝子発現; クローニング; 膵B細胞

今回polymerase chain reaction(PCR)を用いたサブトラクションクローニング法を新たに開発し、膵B細胞株を用いグルコースにより発現が制御される遺伝子の単離、同定および解析を行なった。(方法)高グルコースあるいは低グルコース下にて培養したMIN6細胞からcDNA poolを作成した。各々のcDNA poolを我々が新たに開発したPCRを用いたsubtraction法により高グルコースあるいは低グルコースで遺伝子発現に差を認める遺伝子の単離に成功した。得られたcDNAはsubcloning後、ABI 373 sequencerを用い塩基配列を決定した。クローニングされた遺伝子のDNA配列はBLAST programを用いGenbank,EMBLの遺伝子とhomology searchを行なった。(結果)高グルコースのcDNA poolから19の独立した遺伝子が検出された。既知遺伝子としてprealbumin,IAPP,ublquinoneoxidoreductaseの3種が検出された。これら遺伝子の発現の過剰はNorthern法およびRT-PCR法にて確認した。ほかにhuman ESTのhomologueが2種、残りはこれまでの遺伝子とはhomologyのない遺伝子であった。低グルコースのcDNA poolから11の独立した遺伝子が検出された。そのうち既知遺伝子としてintracisternal A particleとXPB/ERCC遺伝子および2種のmouse ESTが検出された。human ESTのhomologueは2種で残りはこれまでの遺伝子とはhomologyのない遺伝子であった。(考察)今回開発したPCR法を用いたサブトラクションクローニング法は、効率よく簡便に、発現の異なる遺伝子を単離することが可能である。今回膵B細胞株より単離同定されたグルコースにより発現が制御される遺伝子をさらに解析することで、膵B細胞におけるインスリン分泌機構を解明し、さらにこれらの遺伝子はNIDDM発症との関連を検討することにより糖尿病発症遺伝子の候補となりうる可能性がある。

Today back to the polymerase chain reaction (PCR) を い た サ ブ ト ラ ク シ ョ ン ク ロ ー ニ ン グ method を new た に open 発 し, Cui B cell lines を い グ ル コ ー ス に よ り 発 now が suppression さ れ る heritage 伝 son の 単 from, be お よ び parsing line を な っ た. (method) of high グ ル コ ー ス あ る い は low グ ル コ ー ス under に て cultivate し た MIN6 cells か ら cDNA pool を made し た. Each 々 の cDNA pool を I 々 が new た に open 発 し た PCR を with い た subtraction method に よ り high グ ル コ ー ス あ る い は low グ ル コ ー ス で heritage 伝 poor child 発 now に を recognize め る heritage 伝 son の 単 from に successful し た. After obtaining られたcDNA を subcloning, the ABI 373 sequencerを determined <s:1> た using the を base coordination を. ク ロ ー ニ ン グ さ れ た heritage 伝 の with DNA sequence は BLAST program を with い Genbank, EMBL の posthumous son 伝 と homology search line を な っ た. (Result) high グ コ コ ス ス <s:1> cDNA pool ら ら19 independent <s:1> た legates 伝 が検 された された された. Both know legacy 伝 son と し て prealbumin, IAPP, ublquinoneoxidoreductase の three が 検 out さ れ た. <s:1> れら 伝 offspring 伝 occurrence <e:1> overpass Northern method およびRT-PCR method にて confirmation <s:1> た. ほ か に human EST の 'two and residual り が は こ れ ま で の posthumous son 伝 と は homology の な い posthumous son 伝 で あ っ た. Low グ コ コ ス ス <s:1> cDNA pool ら ら11 independent <s:1> た progeny 伝 が検 された された された Son そ の う ち to know both heritage 伝 と し て intracisternal A particle と XPB/ERCC heritage 伝 son お よ び two の mouse EST が 検 out さ れ た. Human EST の 'two で は residual り は こ れ ま で の heritage 伝 son と は homology の な い heritage 伝 son で あ っ た. Today (inspection) back to the open 発 し を た PCR method with い た サ ブ ト ラ ク シ ョ ン ク ロ ー ニ ン グ は, sharper rate よ easy く に, 発 different showing の な る heritage 伝 son を 単 from す る こ と が may で あ る. Today back to Cui B cell lines よ り 単 from be さ れ た グ ル コ ー ス に よ り 発 now が suppression さ れ る heritage 伝 son を さ ら に parsing す る こ と で, Cui B cells に お け る イ ン ス リ ン secretion institutions を interpret し, さ ら に こ れ ら の heritage 伝 son は NIDDM 発 disease と の masato even を beg す 検 る こ と に よ diabetic 発 り heritage 伝 の son alternate と な り う る possibilities Youdaoplaceholder0.

项目成果

E.Yamato,H.Ikegami J-1.Miyazaki,T.Ogihara: "Identification of genes regulated by glucose in a parcreatic beta-cell line by a new method for subtraction of mRNA" Diabetologia. 39. 1293-1298 (1996)

E.Yamato、H.Ikegami J-1.Miyazaki、T.Ogihara：“通过减去 mRNA 的新方法鉴定胰岛 β 细胞系中受葡萄糖调节的基因”糖尿病学。