膵幹細胞を用いた膵発生関連遺伝子の網羅的解析

利用胰腺干细胞综合分析胰腺发育相关基因

• 批准号: 17659055
• 负责人: 倭 英司
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659055/
• 关键词: 幹細胞; 膵幹細胞; ハイスループット

発生には様々な遺伝子が関与することが知られている。我々は幹細胞システムにランダムに発生段階の遺伝子を導入することにより、幹細胞の形質変化を検討するという方法を考案した。我々は膵管由来膵幹細胞の単離に成功した。この細胞はpdx-1遺伝子が陽性で膵管の特徴であるCK19遺伝子を発現しており、増殖力があり、継代培養やクローン化も可能である。この細胞は培養条件により、膵内分泌細胞、膵外分泌細胞、肝細胞に分化する。我々はpolyoma T抗原を用いた、複製作用を利用し、エピゾーマルベクター導入により遺伝子を安定発現させるES細胞系(MG1.19細胞)および導入ベクター(pPyCAGベクター)を開発している。このシステムを膵幹細胞に応用可能で、前年度には上述のエピゾーマルベクター導入により遺伝子を安定発現させることが可能な細胞を作成した。この細胞には複数の遺伝子発現ベクターを効率よく導入可能である。平成18年度にはこの細胞に膵内分泌および膵外分泌細胞の分化や発生い関与するとされる種々の遺伝子のクローニングを行い、転写因子遺伝子発現ベクターを作成し、上記の細胞に導入することにより、転写因子遺伝子の大規模なスクリーニングを行った。その結果、インスリン遺伝子発現が、Pdx-1,MafA, NeuroD1遺伝子の組み合わせでもっとも誘導されること、また同時にインスリン陽性細胞も出現することが確認できた。また、Pax6遺伝子誘導でグルカゴン遺伝子発現が、Ptfla遺伝子ではアミラーゼ遺伝子が発現誘導されることが判明した。これらの結果は膵細胞の発生を検討するうえでも重要な情報を提供するばかりでなく、膵幹細胞を用いたインスリン産生細胞再生誘導方法の開発にも貢献するものである。

The birth of a child is related to the birth of a child. We have examined the methods for introducing genes into stem cell development stages and for studying the morphological changes of stem cells. The stem cells were successfully isolated from the stem cells. These cells are PDX-1 positive, CK19 positive, and CK19 negative. These cells are cultured under different conditions, including endocrine cells, exocrine cells, and hepatocyte differentiation. We developed an ES cell line (MG1.19 cells) using polyoma T antigen and replication, and successfully introduced it into ES cells (pPyCAG cells). The stem cells were introduced into the cells in the previous year. These cells are capable of introducing multiple genes into the genome. In 2018, we conducted a large-scale study on the differentiation and development of endocrine and exocrine cells in these cells, the development of gene expression in these cells, the production of gene expression in these cells, and the introduction of gene expression in these cells. The results showed that the expression of Pdx-1,MafA, NeuroD-1 gene was induced and confirmed by the expression of Pdx-1,MafA, NeuroD-1 gene. Ptfla gene was found to be induced by Pax6 gene. These results provide important information on the development of stem cell regeneration, and contribute to the development of methods for inducing cell regeneration using stem cells.