ヒト白血病性幹細胞の分子生物学的解析-ヒト白血病細胞株TF-1における幹細胞の純化とその遺伝子発現について-

人类白血病干细胞的分子生物学分析 - 人类白血病细胞系 TF-1 中干细胞的纯化及其基因表达 -

• 批准号: 08770843
• 负责人: 渡 潔
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770843/
• 关键词: 白血病性幹細胞; 造血幹細胞; フローサイトメトリー; differential display; TF-1; CD34^+CD38^-; 単一細胞逆転写-PCR; ヒト内因性レトロウイルス

白血病発症時における莫大な数の腫瘍細胞は、実際には白血病性幹細胞と称される少数の細胞群により生み出されると考えられているが、その同定は困難であり、ましてその分子生物学的解析は、来世紀の課題とも言えるものである。本研究は、ヒト白血病細胞株を用いたモデル実験系を使って、白血病性幹細胞の濃縮を試みるとともに、differential display法(Science 257:967-971、1992)を応用して、この特異な細胞集団の分子生物学的解明の端緒をつくることを目的とした。白血病性幹細胞は、ある程度、正常の造血幹細胞にそのcounterpartを求めることができる。現在では、フローサイトメトリーにより、正常幹細胞を濃縮することが可能になってきており、細胞表面抗原であるCD34とCD38、CD4、CD49E、c-kitなどを適宜組み合わせた復-カラー分析により、高純度な幹細胞分画が得られる。モデル細胞としては、検討したTF-1、IMS-1、HU-3といったヒト白血病細胞株の中から、CD34陽性ヒト赤白血病細胞株であるTF-1を用いた。この細胞株では、種々の組み合わせを検討した結果、CD34およびCD38の組み合わせが、本研究に適すると思われた。TF-1の幹細胞分画に相当すると思われるCD34^+CD38^-分画は0.5〜2.1%であった。次にこの少ない細胞群から、いかにして効率よくmRNAを抽出し、以後の分子生物学的な解析に供するかが問題となったが、これは単一細胞逆転写PCRに用いる方法(JCI 97:1666-1674、1996)を応用することで克服可能と思われた。また、differential display法もより簡便、確実で、しかも安価な方法の開発が望まれ、原法をやや改変し、設備の不十分な施設でも行えるようにした。また、このシステムの立ち上げにあたって、トロンボポルチエン依存性のTF-1と非依存性の親株との比較を試みた。この過程でヒト内因性レトロウイルスLTRの発現に差異がある可能性がでてきた。現在、この簡便法を白血病幹細胞に応用することを検討中である。

There is a large number of leukemic cells and leukemic cells during the onset of leukemia. It is said that a small number of leukemic cells have been tested, the same problem has been identified, and molecular biology has been analyzed. In this study, leukemic cell lines were used to elucidate the molecular biology of leukemias, leukemias, leuk Leukemic cells, degree of leukaemia, normal hematopoietic cells, normal hematopoietic cells, counterpart cells, normal hematopoietic cells. At present, it is advisable to determine whether the cell surface antigen (CD34), CD38, CD4, CD49E, and c-kit may be used in a combination of high-level cell analysis and high-level cell analysis. Cell cycle, TF-1, IMS-1, HU-3, leukemic cell line, CD34 cell line, erythroleukemia cell line, TF-1 cell line, leukemic cell line. The results of the cell culture, the combination of CD34 and CD38, the results of the cell culture, the results of the cell culture, the results of the experiments, and the results of the experiments. TF-1 cell division drawing is equivalent to thinking about CD34 ^ + CD38 ^-drawing 0.5% 2.1% cell division. In the second half of the study, the rate of mRNA extraction, and the analysis of molecular biology were used to analyze the problem of molecular biology. The PCR was written in reverse by using the method (JCI 97VR 1666-1674, 1996). The monitoring, differential display, safety and safety monitoring methods are used to improve the safety and safety of the equipment. Please tell me that you are not dependent on TF-1, and that you are not dependent on each other. Due to the internal causes of the process, the possibility of poor performance may be affected by LTR. At present, the method of stool is used to treat leukemia.

项目成果

Watari K et al.: "Pharmaco Kinetic Studies of Intravenous Glycosylated G-CSF" International Journal of Hematology. (in press).

Watari K 等人：“静脉注射糖基化 G-CSF 的药代动力学研究”国际血液学杂志。

Watari K et al.: "Production of interleukin-1β by human henatopoietic progenitor cells" The Journal of Clinical Investigation. 97・7. 1666-1674 (1996)

Watari K 等人：“人类造血祖细胞产生白细胞介素 1β”，临床研究杂志 97・7 1666-1674（1996 年）。

Watari K et al.: "Induction of expression of GM-CSF in candidate human hematopoietic stem cells by TNF-α" Blood. 86・10. 313a (1995)

Watari K 等人：“TNF-α 在候选人类造血干细胞中诱导 GM-CSF 的表达”血液 86·10（1995）。

Watari K et al.: "Production of human G-CSF by various kinds of stromal cells" Stem Cells. 12. 416-423 (1994)

Watari K 等人：“通过各种基质细胞生产人类 G-CSF”干细胞。

渡潔他: "BCR/ABL遺伝子で形質転換したTF-1細胞で特異的に発現が変化している遺伝子の同定" International Journal of Hematology. (in press).

Kiyoshi Watari 等人：“用 BCR/ABL 基因转化的 TF-1 细胞中表达发生特异性改变的基因的鉴定”《国际血液学杂志》（正在出版）。