BCR−ABL導入ヒト細胞株において特異的に変動している遺伝子のクローニング

克隆 BCR-ABL 转导的人类细胞系中特异性波动的基因

• 批准号: 09770815
• 负责人: 渡 潔
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770815/
• 关键词: BCR; ABL; TF-1; ID-1; Differential Display; メラノーマ抗原; PRAME; CML; Ph-ALL

我々は、慢性骨髄性白血病の原因遺伝子であるBCR/ABLを、造血因子依存性ヒト白血病細胞株TF-1に導入し、自律性増殖を獲得した細胞株ID-1を樹立した。この細胞株において発現が増強している遺伝子はBCR/ABLによる細胞のがん化に密接な関連を有していると考えられるため、このような遺伝子の同定を試みた。方法としては、親株であるTF1およびID-1由来のRNAをDifferential Display法を用いて解析した。親株であるTF-1に比べてID-1で発現の増強がみられたバンドをクローニングし、塩基配列を決定したところ、近年新しく同定されたメラノーマの腫瘍抗原PRAMEと同一であることが判明した。PRAMEはノザン法にても、TF-1に比較しID-1で強く発現していることが確認された。次に患者検体におけるPRAME発現を逆転写PCR(RT-PCR)法により検討したところ、CML-BC(3例)およびPh-ALL(3例)では全例で高発現が認められ、CML-CP(3例)、Ph陰性ALL(2例)および正常人骨髄(2例)では発現は低いか認められなかった。PRAMEは、HLA-A24拘束性に細胞障害性T細胞により認識される腫瘍抗原として報告されている(Immunity,6:199-208,1997)が、メラノーマだけでなく肺癌、腎癌、および急性白血病等での発現が認められるほか、正常精巣での発現が高いと報告されている(同)。今回の結果は、PRAMEが、CMLやPh-ALLにおいて芽球のマーカーとなりうる可能性およびPRAMEを標的とした免疫遺伝子療法の可能性を示唆している。

BCR/ABL, hematopoietic factor-dependent leukemia cell line TF-1 was introduced into the cell line, and the cell line ID-1 was established. The expression of BCR/ABL in these cell lines is enhanced and the identity of BCR/ABL in these cell lines is tested. Methods: The Differential Display method was used to analyze the RNA from TF1 and ID-1. In recent years, we have identified a new type of tumor antigen called PRAME. PRAME is responding to the request for identification, TF-1, ID-1, and ID-1. In addition, PRAME was detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) in all patients, CML-BC(3 cases), Ph-ALL(3 cases), CML-CP(3 cases), Ph-negative ALL(2 cases), and normal bone (2 cases). PRAME has been reported to recognize HLA-A24-binding cytotoxic T cell antigens (Immunity,6:199- 208, 1997) and to recognize the development of lung cancer, kidney cancer, and acute leukemia, and to report the development of normal sperm. The results of this study indicate the possibility of PRAME, CML and Ph-ALL targeting immunotherapy.

项目成果

Kiyoshi Wtari: "Production of interleukin 1β by human hematopoietic progenitor cells" The Journal of Clinical Investigation. 97. 1666-1674 (1996)

Kiyoshi Wtari：“人类造血祖细胞产生白介素 1β”《临床研究杂志》97. 1666-1674 (1996)。

Kiyoshi Watari: "Expression of interleukin-1β gene in candidate human hematopoietic stem cells" BLOOD. 84. 36-43 (1994)

Kiyoshi Watari：“候选人类造血干细胞中白细胞介素-1β基因的表达”BLOOD 84. 36-43 (1994)。

Kiyoshi Watari: "Pharmacokinetic studies of intravenous glycosylated recombinant human G-CSF in various hematological disorders" International Journal of Hematology. 66. 57-67 (1997)

Kiyoshi Watari：“静脉注射糖基化重组人 G-CSF 在各种血液疾病中的药代动力学研究”国际血液学杂志。

Kiyoshi Watari: "Induction of GM-CSF expression in candidate human hematopoietic stem cells by TNF-α" BLOOD. 86. 313a- (1995)

Kiyoshi Watari：“通过 TNF-α 诱导候选人类造血干细胞中的 GM-CSF 表达”BLOOD 86. 313a- (1995)。

K.Watari: "A new melanoma artigen,PRAME,is identified as a BCR/ABL-inducible gene in TF-1 cells." BLOOD. 90. 197a- (1997)

K.Watari：“一种新的黑色素瘤抗原 PRAME 被鉴定为 TF-1 细胞中的 BCR/ABL 诱导基因。”