HSP70の腹膜保護作用に関する研究-特に糖化架橋コラーゲンとの関連-

HSP70 腹膜保护作用的研究 - 特别是与糖化交联胶原蛋白相关 -

• 批准号: 08770886
• 负责人: 金 成洙
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770886/
• 关键词: 腹膜中皮細胞; HSP 70; 糖化架橋コラーゲン

1)腹膜中皮細胞とクローンの樹立ラット壁側腹膜を腹壁と一塊にして採取し、collagenase Tyep 1A-Sを用いて37℃45分のincubate後、表面を軽く擦過し腹膜中皮細胞を採取した。培養液はDalbecco's Modified Eagle's Mediumを用いて、胎児牛血清は10%とした。細胞は約4日でconfluentに達した。限界希釈法を用いてクローン化細胞株を樹立した。3〜5継代を実験に使用した。2)HSP70のtrasfectionHSP70遺伝子を発現ベクターpRc/RSVに導入した。腹膜中皮細胞にlipofectinを用いてHSP70遺伝子をtransfectして、HSP70を常時高産生するstable trasfectantを作製した。この実験ではHSP70の産生が確認されたが、コントロールとして作製した、anti-senseをpRc/RSVに導入し、transfectした細胞株もHSP70を発現してしまった。3)糖化架橋collagenの作製0.1%Type IV collagenに40mM D-glucoseを添加して反応させ作製した。分光光度計にて架橋は確認された。4)糖化架橋collagenが細胞動態に及ぼす影響HSP70のtrasfectionには失敗したが、PBS加collagen、manitol加collagen、40mM D-glucose加collagenを腹膜中皮細胞に添加して培養し、HSP70発現量を測定した。いずれの溶液添加においても溶液濃度と比例してHSP70の発現量は増加した。また、HSP70の発現量が多い細胞群ではLDH放出量は少なく、生存率が高い傾向にあった。

1) skin cells in peritoneal と ク ロ ー ン の set ラ ッ ト wall side peritoneum を abdominal wall と a に し て し, collagenase Tyep 1 a - S を with い て 37 ℃ 45 の, surface after incubate を 軽 く grazed し skin cells in peritoneal を take し た. Culture Medium 児 Dalbecco's Modified Eagle''s Mediumを with て て, fetal 児 bovine serum <s:1> 10%と た た. Cells に approximately 4 days でconfluentに to た た. The boundary-limiting hisshashama を uses the を て, ロ, ロ and を of the electrified cell line を to establish <s:1>. 3 to 5継 generations of を experiments に use た た. 2)HSP70 <s:1> trasfection: HSP70 has 伝 subunits を, ベ タ タ, <s:1> pRc/RSVに import, た た. Skin cells in peritoneal に lipofectin を with い て HSP70 posthumous son 伝 を transfect し て, HSP70 を geomagnetic high produce す る stable trasfectant を cropping し た. こ の be 験 で は HSP70 の produce が confirm さ れ た が, コ ン ト ロ ー ル と し て cropping し た, anti - sense を pRc/RSV に import し and transfect し た cell lines も HSP70 を 発 now し て し ま っ た. 3) Glycated bridging collagen, 0.1%Type IV collagenに40mM D-glucoseを added with <s:1> て anti応 させ, <s:1> た. Spectrophotometer にて bridge にて confirm された. 4) Glycated bridging of collagenが cell dynamics に and ぼす influence on HSP70 <s:1> trasfectionに に failure たが たが, PBS plus collagen, manitol plus collagen, 40mM D-glucose plus collagenを peritoneal mesodermal cells に plus <s:1> て culture <s:1>, HSP70 occurrence を determination た た. The ずれ ずれ solution is added to the にお て て て, the concentration of the て solution is increased in the と proportion of the <s:1> てHSP70 solution, and the amount of hSP70 solution is increased in the and た. Youdaoplaceholder0, the occurrence amount of HSP70 is が high, the <s:1> cell population is で, the release amount of <s:1> LDH is <e:1> low, the survival rate is が high, and there is a <s:1> tendency にあった.