オキシヘモグロビンの血管平滑筋細胞遺伝子発現に対する影響

氧合血红蛋白对血管平滑肌细胞基因表达的影响

• 批准号: 08771099
• 负责人: 中村 安伸
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771099/
• 关键词: 脳血管攣縮; 血管平滑筋; オキシヘモグロビン; 分子生物学; 遺伝子発現

血管平滑筋培養細胞にオキシヘモグロビンを加え、その濃度を変化させdifferential mRNA displayを行い、遺伝子発現の変化について検討した。105種類のprimer pairを用いてdifferential displayを行い、40種類の発現レベルの異なるバンドを検出した。これらを同じprimerを用いて再増幅後、blunt end ligation(TA cloningは効率が悪く中止した)にてplasmid vectorに挿入し、サブクローニングを行った。挿入DNAを制限酵素切断にて確認後、自動DNA sequencerを用いて塩基配列を決定した。塩基配列には重複が多く、最終的には半分の約20種類の異なる塩基配列を得た。これらをGenBankにてホモロジーサーチを行ったところ、5種類の既知遺伝子と相同性を認めた。その中で、小胞体に局在するシャペロン蛋白であるBiP(binding protein),同じく小胞体蛋白であるPDI(protein disulfide isomerase),またストレス蛋白のひとつであるubiquitinと部分的に同一の塩基配列を持つものがあった。また、既知遺伝子とは相同性のないものが15種類あり、未知遺伝子の可能性がある。向後、これらの発現レベルの異なる候補遺伝子のノーザン解析を施行し、実際に遺伝子の発現レベルに変化が起こっているかを確定する予定である。また、組織発現の変化を検討し、血管平滑筋に特異性の高いものを優先して、未知遺伝子をプローベとしてcDNAライブラリースクリーニングを行い、その全長を獲得したい。

The smooth tendons of the blood vessels are increased, the cells are increased, the differential mRNA display lines are changed, and the blood vessels are changed. 105s of primer pair use the differential display line and the 40th class of the system to display the output of the system. After using the same size as the primer, blunt end ligation (TA cloning rate