蛋白翻訳機構に着目した動脈硬化進展における血管平滑筋細胞の新規増殖亢進機序

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、独自の血管平滑筋細胞（SMC）の3次元培養系を活用し、「eIF4B、4Gの発現制御がSMCのフェノタイプ調節に伴う増殖亢進に寄与するか」を明らかとすることを目的とする。本研究で用いるヒトSMCは初代培養細胞であるためロットによってタンパク発現量等にばらつきがある。そこで今年度はまず複数ロットのヒトSMCを用いてeIF4Bと4Gのプレート、ハニカム3次元培養におけるmRNA、タンパク発現を確認した。その結果、プレート培養と比較してハニカム培養でタンパクレベルの減少が顕著であること、一方でmRNA減少は比較的緩やかであることを確認した。よってこれらの現象がロットによらず共通の現象である可能性が高いことを確認できた。次にプレート培養ヒトSMCにおいて、eIF4B、4Gの各々のノックダウン、およびダブルノックダウンを行い、増殖への寄与を解析した。その結果、各ノックダウン群で増殖抑制の傾向があることを見出した。また、本研究ではeIF4B、4Gの一過性過剰発現や、eIF4B、4GのmRNA 5’-非翻訳領域とGFPのキメラ遺伝子をプラスミドを用いてヒトSMCに導入する予定である。そこでまずプレート培養によるプラスミド導入条件の検討を行った。その結果、トランスフェクションの効率が不十分である可能性が示された。さらにプレート、ハニカム培養におけるリボソームのモノソーム、ポリソームの分布を確認した。その結果、ハニカム培養ではプレート培養よりモノソームがやや多く翻訳が抑制傾向にあることが示された。