膀胱内反型乳頭腫におけるウィルスゲノムと細胞間接着因子に関する検討

膀胱内翻型乳头状瘤病毒基因组及细胞间粘附因子的研究

• 批准号: 08771280
• 负责人: 兵地 信彦
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771280/
• 关键词: 膀胱; 内反性乳頭腫; ウィルスゲノム; PCR

膀胱内反性乳頭腫5例について手術標本からゲノムDNAを抽出し,ヒトパピローマウィルスとEpstein-Barrウィルスのプライマーを用いてPCR法により増幅し,DNAの増幅を確認した.【方法】過去に当院で切除され病理組織学的に膀胱内反性乳頭腫と診断された症例のパラフィン切片を5μmの厚さに切り出し,キシレン・純エタノール・70%エタノールを用いた脱パラフィンした.各切片は乾燥後に1×PCRバッファーと0.5%Tween20・0.5%Triton X-100・100μlのproteinase Kからなる500μlのバッファー内で56℃,12時間処理し,12,000rpm・10分間遠心して上層10μlに溶解したゲノムDNAをPCR法に用いた.ヒトパピローマウィルスについてはHPVpF(5'-AAGGGCGTAACCGAAATCGGT-3')・HPVp16R・HPVp18R・HPVp33RをプライマーとするTaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Setを使用し,Epstein-Barrウィルスに関してはEBNA-1(5'-GTAGAAGGCCATTTTTCCAC-3')とEBNA-2(5'-CAGGTACATGCCAACAACCTT-3')をプライマーとした.PCR法はTag polymeraseとdNTPを加え,94℃・30秒,55℃・2分,72℃・2分の条件で30サイクルの増幅を行った.反応終了後,PCR産物をエチジウムブロマイドを含むアガロースゲルで電気泳動し,DNA増幅を確認した.【結果】5例全例でヒトパピローマウィルスとEpstein-BarrウィルスのプライマーによるDNAの増幅は確認されなかった.膀胱内反性乳頭腫のDNAには,両ウィルスのDNAは組み込まれていないと判断された.

5 Cases of Reverse Papilloma of the Bladder: DNA Amplification by Polymerase Chain Reaction [Methods] In the past, the pathological histology of bladder inverted nipples was removed in the hospital. The diagnosis of bladder inverted nipples was made by cutting 5μm thick sections. After drying, 1×PCR was performed on each section. 0.5% Tween20·0.5% Triton X-100·100μ l of proteinase K was added to 500μl of the sections. The sections were treated at 56℃ for 12 minutes at 12,000 rpm.ヒトパピローマウィルスについてはHPVpF (5'-AAGGGCGTAACCGAAATCGT-3')·HPVp16R·HPVp18R·HPVp33R·TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set (5'-GTAGAAGGCCATTTCCAC-3') EBNA-2(5'-CAGGTACATGCCAACCTT-3') After the reaction, the PCR product was detected by DNA amplification. [Results] 5 cases of complete cases were confirmed by Epstein-Barr DNA amplification. The DNA of the bladder nipple is divided into two groups: one is the DNA of the bladder nipple, the other is the DNA of the bladder nipple.