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免疫二次応答の抗体3B44の親和力増大機構

二次免疫反应中抗体3B44亲和力增加的机制

基本信息

批准号：
08772057
负责人：
水谷隆太
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772057/
关键词：
結晶構造解析抗体 Fab 親和性ニトロフェノール免疫応答

项目摘要

抗体は、外来抗原の侵襲をくり返しうけることにより、抗原に対してより強い親和力を獲得する。この抗体の親和力増大(affinity maturation)の機構を三次元構造に基づいて明らかにするため、抗体FabのX線結晶構造解析を行った。用いた抗体は、(4-hydroxy-3-nitrophenyl)acetyl(NP)に結合する二次免疫応答の抗体3B44である。ポリエチレングリコールを沈殿剤として3B44Fabの結晶を調製し、ハプテンNPをソ-キングした後、X線回折強度データを収集した。分子置換法により初期モデルを得、結晶学的に精密化して、3B44 Fab-NP複合体の2.5Å分解能での構造を決定した。これを、既に明らかにしている一次免疫応答の抗NP抗体N1G9のFab構造と比較した。3B44 FabはN1G9と同等のドメイン配置を示し、H鎖CDR3以外のCDRループの構造でも、ほぼ対応する空間配置を有している。3B44とN1G9の構造の違いは、抗原結合部位ポケットを構成する10残基のうち、33Hと97Hに見いだされた。97Hを含むH鎖CDR3は、主鎖の構造が異なっている。このため、3B44のPhe 97H側鎖は、N1G9のTyr 97Hとは異なる配置をとり、NPとの疎水的な相互作用を行っている。一方、33Hの変異では、側鎖の構造のみに違いが観察され、N1G9で見られたTrp 33HとNPの間の密すぎる接触は、3B44ではLeuへの置換により緩和されていた。一次応答抗体のTrp33Hから二次応答でのLeuへの変異は、ハプテン結合により適した抗原結合部位の構造を形成し、親和性を高めていると考えられる。

Antibodies have strong affinity for foreign antigens. The affinity maturation of the antibody was analyzed by three-dimensional structure analysis and X-ray crystal structure analysis. Antibody 3B44 was used for secondary immune response by binding to (4-hydroxy-3-nitrophenyl)acetyl(NP). 3B44Fab crystal modulation, X-ray reflection intensity The molecular replacement method was used to determine the structure of 3B44 Fab-NP complex with 2.5 μ m decomposition energy. Comparison of Fab Structure of Anti-NP Antibody N1G9 in Primary Immune Response 3B44 Fab has the same configuration as N1G9 and the same configuration as CDR3. The structure of 3B44 and N1G9 is different, the antigen binding site is different, and the structure of 33H and 97H is different. 97H contains H lock CDR3 and main lock structure. 3B44 Phe 97H side lock, N1G9 Tyr 97H side lock, NP side lock A side, 33H and side lock structure violation detection, N1G9 see Trp 33H and NP between the contact, 3B44 and Leu replacement and mitigation. The structure of the antigen binding site was formed, and the affinity was high.