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メチシリン耐性黄色ブドウ球菌MRSAの耐性伝播阻害に関する構造生物学研究

抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA耐药扩散的结构生物学研究

基本信息

批准号：
16790033
负责人：
水谷隆太
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokai University (2006)The University of Tokyo (2004-2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌MRSAの蔓延は、対感染症薬剤療法への脅威となっている。MRSAは、耐性に必須なペニシリン結合蛋白質の遺伝子mecAを有するとともに、組換え酵素の遺伝子をも有している。これらの遺伝子によりコードされる蛋白質は、耐性遺伝子カセットを部位特異的に切り出し、挿入する働きを持っており、薬剤耐性が蔓延する一因となっている。研究代表者は、耐性遺伝子組換反応がどのような三次元構造によって行われるのか明らかにするため、構造生物学的研究を進めてきた。本年度は、同様の遺伝子組み換えに関わるVDE蛋白質を、薬剤耐性遺伝子組み換え機構のモデルとしてとりあげ、その結晶解析を行った。昨年度までに得ているリコンビナントVDE粗精製画分を用い、VDE蛋白質を精製した。精製は、硫安沈殿による分画の後、カラムクロマトグラフィーにより行った。得られた精製蛋白質を用い、ポリエチレングリコールを沈殿剤として、金属イオン共存下でシッティングドロップ蒸気拡散法により結晶化した。得られた板状結晶を抗凍結剤溶液に透析法により移し、大型放射光施設SPring-8において、極低温下で回折像データの測定を行った。デンシトメトリー処理により、2.5A分解能までの解説強度データセットを得、その同価な回折点の一致度(RmergeI)は0.061であった。現在、分子置換法による初期モデル構築と結晶学的精密化を進めている。

The spread of MRSA in resistant strains and the threat of drug therapy for infectious diseases MRSA must be resistant to the presence of a protein binding protein called mecA, and to the presence of an enzyme binding protein. The protein and tolerance genes of these genes are site-specific, and the protein and tolerance genes of these genes are related to the spread of these genes. The research representatives are engaged in the research of tectonic biology. This year, the same sub-group of VDE protein, protein resistance sub-group of VDE protein resistance sub-group In the past year, VDE crude purification and VDE protein purification were carried out. After refining, sulfur and sulfur, it will be divided into three parts. To obtain purified protein, the crystallization method is used, and the crystallization method is used. Determination of plate-like crystals and freeze-resistant solutions by dialysis method, large radiometric apparatus SPring-8, and ultra-low temperature reflection 2.5A resolution energy is obtained by the interpretation intensity of the data, and the consistency of the same inflection point (RmergeI) is 0.061. At present, the molecular replacement method is in the early stage of construction and crystallization.