ヒトEGFレセプターを標的とする人工抗体を用いた生体内遺伝子導入法の開発

使用针对人EGF受体的人工抗体开发体内基因转移方法

• 批准号: 08772106
• 负责人: 高柳 淳
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772106/
• 关键词: 遺伝子治療; 扁平上皮癌; EGFレセプター; 抗体; EGFR; 一本鎖抗体; イムノジーン; 遺伝子導入

当研究室では抗体の細胞特異性およびポリリジンのDNA結合性と保護作用を利用した新しい遺伝子運搬体「抗体/DNA複合体(イムノジーン)」を独自に開発し、固体レベルでの扁平上皮癌の遺伝子治療法を目指している。それを効率よく作製しかつ臨床での有効性・安全性を高めるため、イムノジーンを人工抗体で作製することが本研究の目的である。改良の余地はあるが、この目的はほぼ達成できた。また人工抗体の大量産生・精製法も確立した。方法はまず抗EGFレセプター・モノクローナル抗体B4G7の遺伝子からPCR法を駆使して一本鎖抗体(scBH)遺伝子を作製した。大腸菌で発現させたscBHはB4G7抗体と競合することを確認した。これにポリリジンを化学結合させると、抗原結合能が消失した。そのため抗体自身にDNA結合性を持たせるためC末に8リジンを付加した一本鎖抗体(scHBFL)遺伝子を作製した。これは大腸菌では分泌不可能であったので、メタノール資化性酵母で大量産生させ精製した。電気泳動法によって、scHBFLはDNA結合能を有していることを確認した。つぎに扁平上皮癌細胞A431に対するレポーター遺伝子の導入効率を検討した。scHBFL単独では遺伝子導入は観察されなかったが。ポリリジンを併用した時scHBFL依存的に遺伝子導入が観察された。β-ガラクトシダーゼをレポーター遺伝子にしたときの活性染色を指標にすると最大導入効率は約0.1%であった。これは、当研究室で開発した抗体のFab断片を利用したイムノジーン法の約1/10の効率であるため、現在scHBFLのDNA結合性を高めるなど改良を行っている。さらに、安全性を高めるため人工抗体のヒト型化も並行して行っている。

When the laboratory tests specific antibodies, specific antibodies, combination of DNA and protective effects, the use of antibodies

项目成果

N.Shimizu: "Immunogene Approach toward Cancer Therapy Using Epidermal Growth Factor Receptor-Mediated Gene Delivery" Cancer Gene Therapy. 3・2. 113-120 (1996)

N.Shimizu：“利用表皮生长因子受体介导的基因传递进行癌症治疗的免疫原方法”癌症基因治疗。 113-120。

N.Shimizu: "Use of Growth Factor Receptor-Mediated Endocytosis for Therapeutic Gene Delivery : Immunogene Approch" Cellular Pharmacdogy AIDS Sciences. 3. 263-267 (1996)

N.Shimizu：“使用生长因子受体介导的内吞作用进行治疗性基因传递：免疫基因方法”细胞药理学艾滋病科学。

S.Yamashita: "Temporal and Cell-Type Specific Expression of c-fos and c-jun Protooncogenes in the Mouse Uterus After Estrogen Stumulation" Endocrinology. 137・12. 5468-5475 (1996)

S. Yamashita：“雌激素刺激后小鼠子宫中 c-fos 和 c-jun 原癌基因的时间和细胞类型特异性表达”内分泌学 137・12（1996）。