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抗体を利用した遺伝子導入法「ヒト型イムノジーン法」の開発

开发利用抗体的基因转移方法“人类免疫基因法”

基本信息

批准号：
13770670
负责人：
高柳淳
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

現在、遺伝子治療のための遺伝子キャリアーとして実用化されているのは組換えウィルスベクターや合成リポソームである。しかし、種々の欠点のため臨床治験では限られた効果しか報告されていない。これらの欠点を克服し遺伝子治療の潜在的な能力を引き出すため、当研究室では新しい遺伝子キャリアーとして「モノクローナル抗体/DNA複合体(イムノジーン)」を独自に開発し、個体レベルでの遺伝子治療法を目指している。最近、抗体分子の化学的修飾を必要としない一本鎖抗体を利用した「組換えイムノジーン法」による遺伝子導入に成功した。またその抗体のヒト型化にも成功した。本研究ではより高い遺伝子導入効率および生産効率を目指しさらなる改良を加えている。種々のDNA結合性テイルを持つ人工抗体「イムノポーター」を作製し、酵母菌での分泌効率および遺伝子導入効率を評価した。このうち、負電荷テイル(Asp_4Ser)_5を持つイムノポーター遺伝子を選択し、産生条件および精製条件を最適化した。さらに、精製イムノポーターを用いて抗体・DNA複合体「イムノジーン」調製条件の至適化を行い、培養細胞に遺伝子導入を試みたところ、リポフェクション法に匹敵する結果が得られた。この成果に関しては論文印刷中である。また、免疫原性をなくして安全性を高めることにより反復投与を可能にするヒト型化抗体遺伝子を利用したイムノポーターの産生にも成功した。さらに、生体内での複合体安定性を高めると考えられる疎水的結合部位を導入し、酵母菌での産生効率を下げない短い新型テイルの設計・発現にも成功した。今後、担癌マウスを用いた遺伝子治療実験を行い、導入効率およびイムノジーンの生体内動態を検討する予定である。

Now, the treatment of the remaining children is the treatment of the remaining children. The combination of ているのは and えウィルスベクターや is combined into リポソームである.しかし, kind of 々のowed point のためclinical treatment 験ではlimited られたeffect しか report されていない.これらのowed pointをovercoming the potential な ability of し缝子treatmentのをinduced き出すため、When the laboratory では新しい伝子キャリアーとして「モノクローナルantibody/DNA complex (イムノジーン)」を solo に开発し, individual レベルでの缝子treatment method をocular finger している. Recently, the chemical modification of antibody molecules has been necessary, and the introduction of the "replacement method" into the antibody has been successfully introduced. The type of antibody that has been tested has been successfully transformed. This study aims to improve the efficiency of the introduction of high-quality materials and the improvement of production efficiency. A kind of DNA-binding artificial antibody "イムノポーター" was produced, and the secretion efficiency of yeast was evaluated by the introduction efficiency of the remaining vines.このうち, negative charge テイル(Asp_4Ser)_5をhold つイムノポーター伝子を选択し, production conditions およびrefining conditions をoptimization した. The conditions for preparation of さらに and purified イムノポーターを using いて antibody and DNA complex "イムノジーン" are optimized Lines and cultured cells are introduced and the results are tested. The paper about the results of the project is currently being printed.また, immunogenicity, safety, high safety, no possibility of repeated administration The するヒヒト-typed antibody legacy was successfully produced using the したイムノポーターの.さらに、The stability of the でのcomplex in vivo is high and the binding site of めるとtest えられる疎水 is introducedし、The yeast production efficiency is low and the new げないshort design is successful. From now on, the cancer-carrying disease will be treated with いた缝子子 in the treatment of 実験を行い, and the efficiency of the introduction of およびイムノジーンのvivo dynamic を検杝する is scheduled to be determined.