ヒト成長ホルモン結合蛋白の生成に関与するプロテアーゼに関する研究

参与人生长激素结合蛋白产生的蛋白酶的研究

• 批准号: 08772131
• 负责人: 斎藤 嘉朗
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 国立衛生試験所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772131/
• 关键词: ヒト成長ホルモン; ヒト成長ホルモン結合蛋白; 調節機構; 蛋白質リン酸化反応

ヒトIM-9細胞からのヒト成長ホルモン結合蛋白の放出が、ホルボールエステルの一種であるPhorbol 12,13-dibutyrate(PDBu)添加により、2-3倍に増加した。このPDBuの効果は、濃度および時間依存的であった。PDBuの効果は、添加後10分からみられること、蛋白合成阻害剤cycloheximideにより阻害されないことから、新たな蛋白合成はホルボールエステルの作用に関与していないことが示唆された。さらに、このPDBuによる成長ホルモン結合蛋白放出の促進効果は、protein kinase Cの特異的阻害剤であるRo31-8220により阻害されること、protein kinase Cの合成活性化剤である1-oleoyl-2-acetyl-glycerolによっても結合蛋白放出が促進されたことから、ホルボールエステルによる結合蛋白放出促進にprotein kinase Cが関与していることが示唆された。さらに,H-89処理によっても,結合蛋白放出促進は阻害された.IM-9細胞に存在するprotein kinase Cの分子種を調べたところ、α,δ,μ,ιの4種が検出された。この内、ホルボールエステルに反応するα,δ,μが成長ホルモン結合蛋白放出促進に関与している可能性が考えられた。さらに、様々な蛋白質リン酸化反応を抑制することが知られているK-252aおよびK-252bも、ホルボールエステル(PDBu)による結合蛋白放出を阻害した。この中、K-252bはK-252aに比べて細胞内に容易に透過しないことから、細胞外のリン酸化反応が結合蛋白放出促進に関与していることが示唆された。^<32>P-ATPを用いた細胞外リン酸化反応の結果から、実際にPDBu刺激により細胞外の数種の蛋白のリン酸化の促進がみられること、このリン酸化がK-252bにより濃度依存的に阻害されることが明らかとなった。K-252bおよびH-89の結合蛋白放出促進効果の阻害濃度と細胞外蛋白質リン酸化阻害濃度との相関から、分子量78kdaの蛋白が結合蛋白放出に関与しているプロテアーゼである可能性が考えられた。

ヒ ト IM - 9 cells か ら の ヒ ト growth ホ ル モ ン binding protein released の が, ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル の a で あ る 12, 13 - Phorbol dibutyrate (PDBu) add に よ り, 2-3 times に raised し た. The effect of <s:1> <s:1> PDBu <s:1> is であった, and the concentration is および and time-dependent であった. PDBu の unseen fruit は, add 10 points after か ら み ら れ る こ と, protein synthesis resistance against tonic cycloheximide に よ り resistance against さ れ な い こ と か ら, new た な protein synthesis は ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル の role に masato and し て い な い こ と が in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0, <s:1> <s:1> PDBuによる growth ホ <s:1> モ モ <s:1> binding protein release <s:1> promoting effect, protein kinase C <s:1> specific inhibitor であるRo31-8220によ inhibits される と と と と と and protein kinase C の synthetic activeness tonic で あ る 1 - oleoyl - 2 - acetyl - glycerol に よ っ て も binding protein release が promote さ れ た こ と か ら, ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル に よ る binding protein released to promote に protein kinase C が masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, H - 89 処 に よ っ て も, binding protein released to promote は resistance against さ れ た. IM - 9 cells exist に す る protein kinase C の molecules of を adjustable べ た と こ ろ, alpha, delta, mu, ι の four が 検 out さ れ た. こ の, ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル に anti 応 す る alpha, delta, mu が growth ホ ル モ ン binding protein released to promote に masato and し て い る possibility が exam え ら れ た. さ ら に, others 々 な protein リ ン acidification anti 応 を inhibit す る こ と が know ら れ て い る K - 252 - a お よ び K - 252 - b も, ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル (PDBu) に よ る binding protein release を resistance against し た. こ の, K - 252 - a - 252 - b は K に than べ て in cells に に easily through し な い こ と か ら, extracellular の リ ン acidification anti 応 が binding protein released to promote に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. ^ < > 32 P - ATP を with い た extracellular リ ン acidification anti 応 の results か ら, be interstate に PDBu stimulus に よ り extracellular protein の several の の リ ン acidification の promote が み ら れ る こ と, こ の リ ン acidification が K - 252 - b に よ り concentration dependent に resistance against さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. K - 252 - b お よ び H - 89 の binding protein released to promote working concentration of fruit の resistance against と extracellular protein リ ン acidification resistance against concentration と の phase masato か ら, molecular weight of 78 kda protein の が binding protein release に masato and し て い る プ ロ テ ア ー ゼ で あ る possibility が exam え ら れ た.