ヒト成長ホルモン結合蛋白の生成及びその調節に関する研究

人生长激素结合蛋白的产生及调控研究

• 批准号: 07772206
• 负责人: 斎藤 嘉朗
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 国立衛生試験所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772206/
• 关键词: ヒト成長ホルモン; ヒト成長ホルモン結合蛋白; 生成機構; 調節機構

1.ヒト成長ホルモン結合蛋白(hGH-BP)の生成機構についてヒトIM-9細胞より、抗ヒト成長ホルモン受容体抗体GHRP2-88に反応する分子量60kDa及び55kDaの蛋白が放出された。ヒト成長ホルモン(hGH)固定化ゲルに結合した画分のイムノブロット法による解析、および化学架橋剤を用いた解析により、これら2種の蛋白は、いずれもhGH結合能を持つこと、即ちhGH-BPであることが明らかとなった。本hGH-BPのhGHに対する親和定数は、4.6×10^8M^<-1>であった。本hGH-BP放出は時間依存的であり、放出量は、1時間当たり、細胞膜上のヒト成長ホルモン受容体の約5%であった。cycloheximide(蛋白合成阻害剤)又はbrefeldin A(小胞体からゴルジ体への輸送を阻害)を用いた実験より、IM-9細胞におけるhGH-BPの生成に、新たな蛋白合成及びその輸送は必要ないことが示唆された。次に、hGH前処理(45 nM hGH、2時間処理により細胞膜上の受容体の90%以上が、細胞内に移行し、速やかに分解される)により、hGH-BP放出は殆ど阻害されたこと、およびtrypsin前処理により細胞膜外側部分の蛋白を分解した場合には、hGH-BP放出は全く認められなかったことから、IM-9細胞より放出されるhGH-BPは、細胞膜上の受容体に由来することが示唆された。本hGH-BP放出は、EDTA及び1,10-phenanthroline処理により濃度依存的に阻害されたが、EGTAでは殆ど阻害さされなかった。EDTAによるhGH-BP放出阻害は、Mg^<2+>及びCo^<2+>の添加により回復がみられた。これらの結果から、hGH-BP放出における金属プロテアーゼの関与の可能性が考えた。2.ヒト成長ホルモン結合蛋白(hGH-BP)生成の調節機構についてhGH(45 nM)添加により、試みたインキュベーション2時間までの条件下では、hGH-BPの放出量は顕著に減少した。これは、受容体の細胞内移行によると考えられる。一方、Protein kinase Cを活性化する作用を持つホルボールエステルの共存により、hGH-BP放出は増加した。

1. The mechanism for the production of hGH-BP was established in IM-9 cells, and the anti-hGH-BP receptor antibody GHRP2-88 was released from 60kDa and 55kDa proteins. The binding energy of hGH immobilized on two kinds of proteins was determined by the method of chemical bridging agent analysis, and the binding energy of hGH immobilized on two kinds of proteins was determined by HGH-BP analysis. The hGH-BP affinity is 4.6×10^8M<-1>. The release of hGH-BP is time-dependent, and the release amount is about 5% of the receptor on the cell membrane. Cycloheximide(inhibitor of protein synthesis) and brefeldin A(inhibitor of cellular transport) were used to detect the production of hGH-BP in IM-9 cells, and to detect the need for protein synthesis and transport. secondary, hGH pretreatment (45 nM hGH, 2-time treatment, more than 90% of the receptor on the cell membrane, intracellular migration, rapid decomposition), hGH-BP release, hGH-BP release, hGH The origin of receptors on cell membranes This hGH-BP release was inhibited by EDTA and 1,10-phenanthroline treatments in a concentration-dependent manner. EDTA, Mg^&lt;2+&gt; and Co^&lt;2+&gt; are added to the mixture. The results of this study include the relationship between the release of hGH-BP and the possibility of its occurrence. 2. The regulation mechanism of hGH binding protein (hGH-BP) production decreased with the addition of hGH(45 nM). The intracellular migration of receptor and receptor was studied. On the one hand, Protein kinase C activity continues to increase in the presence of hGH-BP.