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胎仔神経細胞の非分裂化におけるfos/junの役割とその発現細胞の分離・培養

fos/jun 在不分裂胎儿神经元中的作用以及表达它的细胞的分离和培养

基本信息

批准号：
08780763
负责人：
下川哲昭
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780763/
关键词：
AP1 fos jun Fluorescent probe Detection method

项目摘要

胎仔神経細胞におけるfos/jun発現細胞を分離・培養するために、まず株化細胞(PC-12)を用いて目的であるfos/jun発現細胞の同定法を開発した.[1]蛍光ラベルしたAP-1 DNA断片の細胞導入ラットc-jun遺伝子のプロモーター領域からAP-1 site(5'-TGACTCA)を含むDNA断片を調整し、臭化エチジウムで蛍光標識した。これをFos/Jun検出のプローブとしてカチオン性リポソームを用いてPC-12に導入した。(交付申請書「研究実施計画」の[2]に相当)[2]蛍光顕微鏡下でのFos/Jun蛋白質発現細胞の同定発ガンプロモーターの一つであるphorbol-ester(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)を[1]の処理をした培養液に添加し、Fos/Jun蛋白質を強制発現させた。Fos/Jun蛋白質を発現している細胞と発現していない細胞を区別するために、蛍光の核内への集積の有無を指標として励起波長488nmにて核内で蛍光を発している細胞の同定を試みた。その結果、無処理の細胞では蛍光DNAプローブの核への集積は認められなかったが、PMAを添加しFos/Jun蛋白質を強制発現させた細胞は核内に強い蛍光が観察された。このことは蛍光DNAプローブを用いた本法がFos/Jun蛋白質発現細胞の同定に有用であることを意味する。(交付申請書「研究実施計画」の[3]に相当)

Isolation, culture and identification of fos/jun developing cells from fetal neurons (PC-12). [1]The introduction of AP-1 DNA fragments into cells into the field of RACTOR-Jun gene expression has been carried out at the AP-1 site(5'-TGACCCA), which contains DNA fragments to adjust and degrade the environment. The Fos/Jun search engine was launched using PC-12. (Corresponding to [2] of the submitted application "Research Implementation Plan")[2] A test of phorbol-ester(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA) in cells producing Fos/Jun protein under microscope [1] was carried out. Fos/Jun protein expression in cells and expression in cells and differentiation of Fos/Jun protein expression in cells and expression of Fos/Jun protein in cells and expression of Fos/Jun protein in cells. As a result, the cells without treatment were exposed to light from the nucleus, and PMA was added to the nucleus. This method is useful for the identification of Fos/Jun protein. (Equivalent to [3] of the submission application "Research Implementation Plan")