RT-PCR法による単一ニューロンのカルシウム結合タンパクmRNAの解析

RT-PCR法分析单个神经元钙结合蛋白mRNA

• 批准号: 08780782
• 负责人: 都筑 馨介
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780782/
• 关键词: マルチプレックスPCR; パッチクランプRT-PCR法; カルシウム結合タンパク; 神経ペプチド; 非錐体ニューロン

大脳皮質のニューロンは形態学的に錐体細胞と非錐体細胞に分類される。非錐体細胞は多様であり、発火パターンや、カルシウム結合タンパク、神経ペプチドの発現が異なるものが存在することが知られている。本研究ではパッチクランプRT-マルチプレックスPCR法を用いて、非錐体細胞のインパルス発火と発現しているカルシウム結合タンパク、神経ペプチドのmRNAの関係を解析した。ラット前頭皮質急性スライス標本にホールセル・カレントクランプ法を行った。皮質非錐体細胞は100Hz程度の高頻度のインパルスを発射するもの(fast spiking cells,FS)、50Hz程度のインパルスを発するもの(regular spiking nonpyramidal cells,RSNP)、インパルス発射の頻度が不規則なニューロン(irregular spiking cells,IS)の3種に分類された。電気生理学実験終了後、細胞質のmRNAをパッチ電極に回収し、逆転写反応を行い、3種のカルシウム結合タンパク(calbindin (CB),parvalbumin (PV),calretinin (CR))と4種の神経ペプチド(neuropeptide Y (NPY),vasoactive intestinal polypeptide (VIP),somatostatin (SS),cholecystokinin (CCK))のプライマー、合わせて7種14本を同時に加えてマルチプレックスPCRを行った。FS細胞は、カルシウム結合タンパクPVとCBを単独または共存して発現するとともに、半数以上の細胞で神経ペプチドを一種類以上発現していた。RSNP細胞はカルシウム結合タンパク、神経ペプチドとも様々な組み合わせで発現していた。IR細胞はカルシウム結合タンパクCRと神経ペプチドVIPを共存して発現していた。

The classification of pyramidal cells and nonpyramidal cells in the cortex is morphological. Non-pyramidal cells are diverse, fire resistant, complex, and present in different ways. In this study, we analyzed the relationship between mRNA expression in non-pyramidal cells and mRNA expression in pyramidal cells by PCR. The method of acute cerebral infarction is used to treat cerebral infarction. Cortical nonpyramidal cells are classified into three groups: fast spiking cells (FS), regular spiking nonpyramidal cells (RSNP), and irregular spiking cells (IS). After electrophysiology was completed, cytosolic mRNA was detected by electroporation, reverse transcription, 3 kinds of protein combinations (calbindin (CB),parvalbumin (PV),calretinin (CR)), 4 kinds of neuropeptide Y (NPY),vasoactive intestinal polypeptide (VIP),somatostatin (SS), cholecystonin (CCK)), 7 kinds of protein combinations and 14 kinds of PCR were detected simultaneously. FS cells combine with PV and CB to produce more than one species of cells. RSNP cells are organized in a way that allows them to interact with each other, and the brain to interact with each other. IR cells co-exist with CR and VIP cells.

项目成果

Bruno Cauli: "Molecular and physiological diversity of cortical nonpyramidal cells" Journal of Neuroscience. 印刷中 (1997)

Bruno Cauli：“皮质非锥体细胞的分子和生理多样性”神经科学杂志正在出版（1997）。