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脱感作に関与するAMPA型グルタミン酸受容体サブユニットの同定

参与脱敏的 AMPA 型谷氨酸受体亚基的鉴定

基本信息

批准号：
07780735
负责人：
都筑馨介
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、ニューロンの電気生理学的に記録されたAMPA型グルタミン酸受容体チャネルの脱感作と、発現している受容体チャネルサブユニットの関係を明らかにすることである。AMPA型受容体は、GluR1, GluR2, GluR3, GluR4の4種類のサブユニットから構成させており、全てに、flip型、flop型のスプライシングバリアントが存在し、さらにGluR2, GluR3, GluR4にはG型、R型のRNAエディティングバリアントが存在する。さて、電気生理学的にAMPA型グルタミン酸受容体チャネルは、カルシウムイオン(Ca^<2+>)に対し透過性を示さないもの(Type I)と透過型のもの(Type II)の2種類が存在する。そこで、まずこれら2種のAMPA型グルタミン酸受容体チャネルが発現しているニューロンにおいて受容体チャネルの脱感作を計測した。小型のニューロンを対象にパッチクランプ法によりアウトパッチを作成し、ピエゾ素子を用いた高速液交換法により1mMのAMPAを投与し、電気生理学的に脱感作の時定数を測定した。AMPAによって生じた内向き電流Type I受容体、Type II受容体どちらにおいても急速に脱感作した。脱感作の時定数(τ)はType I受容体においては、1.5msecから8.5msecと広いレンジにわたって分散した。一方、Type II受容体のτは1.5msecから2.8msecの狭いレンジに集中した。この異なった種類の受容体が発現しているニューロンを対象に、パッチ電極内にニューロンの細胞質を回収し、マイクロチューブに移して、逆転写遺伝子増幅反応を行い(パッチクランプーRT-PCR法)、発現しているAMPA型受容体mRNAの種類を調べたところ、Type II受容体を発現しているニューロンにおいては、flop型のGluR1とflop型のGluR4のmRNAのみが発現しているのに対し、Type I受容体を発現しているニューロンにおいては、GluR2を含む様々な組み合わせのAMPA型受容体のmRNAが発現していた。

The purpose of this study was to document the electrophysiology of AMPA type receptor development and to discover the relationship between receptor development and receptor development. AMPA-type receptors are composed of four types: GluR1, GluR2, GluR3, GluR4, and GluR4. The four types of receptors are completely different from each other. The four types of receptors are flip type, flop type, and G type. GluR2, GluR3, GluR4, and R type. In addition, there are two kinds of AMPA type acid receptor in electrophysiology: Type I and Type II (Ca <2+>). Two kinds of AMPA-type receptor growth were measured. The time limit for the induction of small and medium size AMPA was determined by the high speed liquid exchange method. AMPA generates inward currents from Type I receptors, Type II receptors, and rapid decoupling. The number of desensitization times (τ) is 1.5 msec for Type I receptors. A, Type II receptor τ is 1.5 msec, 2.8 msec, and concentrated. The different kinds of receptors appear in the cytoplasm of the target cells, in the electrode, and in the reverse direction.(RT-PCR method), the Type of AMPA receptor mRNA detected in the medium, the type of Type II receptor mRNA detected in the medium, the flop-type GluR1 mRNA detected in the medium, the flop-type GluR4 mRNA detected in the medium, the type I receptor detected in the medium, the type of AMPA receptor mRNA detected in the medium, the flop-type GluR1 mRNA detected in the medium, the flop-type GluR4 mRNA detected in the medium, the type of AMPA receptor mRNA detected in the medium, the type of AMPA GluR2 mRNA expression in AMPA-type receptors was detected in the presence of protein.