ペプチド結合の加水分解触媒抗体の作成およびアミノ酸配列決定法への応用

肽键水解催化抗体的制备及其在氨基酸测序方法中的应用

• 批准号: 09740473
• 负责人: 平賀 良知
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09740473/
• 关键词: プロテアーゼ; カルボキシペプチダーゼY; 活性部位; 基質選択性; ペプチド結合加水分解; アミノ酸; 疎水性; 遷移状態; カルボキシペプチターゼY; 遷移状態アナログ

ペブチド結合加水分解反応を触媒するカルボキシペプチダーゼY(CPY)は,他のプロテアーゼによって加水分解されにくいプロリン(Pro)を含めたすべてのアミノ酸に隣接したアミド結合(Xaa-Pro;Xaa=amino acid)をC末端側から加水分解するセリンプロテアーゼである。ペプチド結合の加水分解の触媒抗体の作成を目的として,アミド結合の窒素原子上に水素原子をもたないProおよびサルコシン(Sar)を用い,水素原子の影響について検討した。基質は,ジペプチド(Z-Phe-Yaa;Yaa=Pro,Sar,Gly)を用い,それぞれの基質に対する加水分解速度パラメータを比較した。Yaa加水分解におけるKcat値は,Gly>Pro>Sar,kcat/Km値は,pro>Gly>Sarの順であった。これらのことから,ペプチド結合の窒素原子の水素原子をアルキル置換することによって四面体中間体がより安定化されることが示された。これは,アルキル基の誘起効果によってC-N結合の電子密度が上がり,結合開裂が起こりにくくなっていると考えられる。一方,CPYによるペプチド鎖加水分解におけるP2位アミノ酸の影響を検討した。トリペプチド基質(Z-Xaa-Gly-Pro;Xaa=Phe,Val,Ala,Leu,lle,Gly;Z=benzyloxycarbonyl)を用い,Xaaの違いによるPro加水分解における初速度を比較した。初速度は,Phe>lle>Val>Leu>Ala>Glyの順で,Pheにおける初速度は,Glyの約60倍であった。初速度とXaaの側鎖の疎水性との相関は,Leuとlleを除いて,直線関係が見られた。Leuとlleに相関が見られなかったのは,それぞれの側釘の立体障害と考えられた。これらのことから,CPYは活性部位においてGly-Pro結合だけでなく,P2位アミノ酸の側鎖の疎水性を認識していることが明らかとなった。

The combination of water decomposition and reverse reaction of water decomposition is sensitive to the presence of water. In this case, the effect of water decomposition on the decomposition of water (Pro) is studied in this paper. The results show that there is no significant difference between the two groups (Pro). The results show that there is no significant difference in the amount of acid in the solution (Pro). The purpose of this study is to combine the water with water to decompose the catalyst antibody to form the target antibody. the water atom on the asphyxiant atom is linked to the Pro atom and the water atom is used to determine the molecular weight (Sar), and the water atom is linked to the asphyxiant atom. The speed of water decomposition is much faster than that of water decomposition. Yaa is added to water to decompose Kcat oil, Gly>Pro>Sar,kcat/Km oil, pro>Gly>Sar oil and so on. The asphyxiant atom, the water atom, the asphyxiant atom, the water atom, the water atom, the water In the first place, it is necessary to combine the density of electrons in combination with the density of electronics. in addition, it is necessary to improve the performance of the electronic density system. On one side, CPY, water, water, P _ 2, acid, acid, acid and acid. Using the Xaa resin, the Pro is decomposed with water and the initial velocity is higher than the original speed. The initial velocity is about 60 times higher than that of Phe>lle>Val>Leu>Ala>Gly, Phe and Gly. The initial speed of Xaa is different from that of Leu, and that of Leu is different from that of lle. Leu

项目成果

Munetaka Tokumasu: "Selective Conversion of Bromo-oxirane into Tetrahydropyranylacrylate by Epoxide Ring Opening" J.Chem.Soc., Chem.Commun.1997(9). 875-876 (1997)

Munetaka Tokumasu：“通过环氧化物开环将溴环氧乙烷选择性转化为四氢吡喃基丙烯酸酯”J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1997(9)。

Yoshikazu Hiraga: "Evidence for Biosynthetic meta-Hydroxliation of Benzoic Acid by Means of Isolation of Only meta-Functionalized Phenylpentanoic Acids from Athyrium yokoscense" Nat.Prod.Lett.11(3). 187-192 (1998)

Yoshikazu Hiraga：“通过从 Athyrium yokoscense 中仅分离间官能化的苯基戊酸来生物合成苯甲酸的间羟基化的证据”Nat.Prod.Lett.11(3)。

Takayuki Suga: "Dynamic Aspects of Natural Products Chemistry, Chapter 4, Kodansha, Tokyo" Biosynthesis of Monoterpenoids in Higher Plants : Mechanisms of Chain Elongation and Chiral Center Generation, 73-96 (1997)

Takayuki Suga：“天然产物化学的动态方面，第 4 章，讲谈社，东京”高等植物中单萜的生物合成：链伸长和手性中心生成的机制，73-96 (1997)

Yoshikazu Hiraga: "Ion-transport Activity of Phenylpentanoic Acids Occurring in the Roots of Athyrium yokoscense" Biosci.Biotechnol.Biochem.in press. (1999)

Yoshikazu Hiraga：“Athyrium yokoscense 根部发生的苯基戊酸的离子传输活性”Biosci.Biotechnol.Biochem.in press。

Yoshikazu Hiraga: "(-)Loliolide and Other Germination Inhibitory Active Constituents in Equisetum arvense" Nat.Prod.Lett.10. 181-186 (1997)

Yoshikazu Hiraga：“问荆中的(-)Loliolide 和其他发芽抑制活性成分”Nat.Prod.Lett.10。