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複数の基質取り込みサイトを持つ超分子型反応場の設計と活性発現

多底物摄取位点超分子反应场的设计及活性表达

基本信息

批准号：
09750882
负责人：
一二三恵美
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hiroshima Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09750882/
关键词：
超分子抗体ポルフィリンエイズ基質

项目摘要

本年度に取り組む課題は交付申請書の研究実施計画にあるように1、分子モジュールA・Bの連結、2、超分子の構築、3、活性発現の反応条件の検討、である。1、分子モジュールA・Bの連結のためにはどのリンカー配列が良いか決める必要があり、コンピューターを用いて検討した。分子モジュールA・Bの両者が近傍に来ることがリンカーの必要条件である。そこで、-Pro-Pro-Pro-,-Pro-His-His-,-Gly-Pro-などのいくつかの配列をインプットし分子力学場計算をしたところ-Gly-Pro-のみが目的の立体構造を取った。そこで以下の実験はこの配列を採用した。2、超分子前駆体として分子モジュールA・Bを一Gly-Pro-で架橋した36merのポリペプチドの合成を行った。分子モジュールA・Bを別々に合成して-Gly-Pro-で架橋する方法ではなく、ペプチド自動合成機でC末端から1段でN末端まで合成した。精製後MSで確認を行った。次に、この超分子前駆体を使って抗原であるエイズウイルスgp41ペプチドおよびポリフィリンの取り込みを各種分光学的手法を用いて検討した。CDスペクトルから、gp41ペプチドは超分子前駆体への取り込みがゆっくりしていて、しかも取り込まれた後も、ゆっくりしたコンフォーメーション変化を起こすと推定された。一方ポルフィリンはすぐに取り込まれ、その後ゆっくりと超分子前駆体のコンフォーメーション変化が起こること思われた。この結果はUVスペクトルおよび表面プラズモン共鳴法の結果からも支持された。3、超分子前駆体と両抗原とを同一の反応系に加え、各種実験条件を変化させてgp41ペプチドの消失をHPLCで追跡した。ポルフィリンに金属イオンとしてMnを導入したものを用い、反応温度50〜60ﾟCで数十倍の酵素活性を発現できた。この時、Mnを含まないポルフィリンでは全く活性を示さなかった。

This year's group's project project, delivery application form, research implementation plan, project 1, molecule projectールA・B's connection, 2. The construction of supramolecular, 3. The reaction condition of active development, の検 Discussion, である. 1. Molecule A・B's Linking Arrangement It is necessary to use the いて検 to discuss the いて検した. The necessary conditions for the molecular structure of A and B are as follows:そこで、-Pro-Pro-Pro-,-Pro-His-His-,-Gly-Pro-などのいくつかのalignmentをインプットしMolecular mechanics field calculationをしたところ-Gly-Pro-のみがpurposeのthree-dimensional structureをtakeった.そこでThe following の実験はこのalignment is adopted. 2. Supramolecular precursor molecule molecule モジュールA・Bを-Gly-Pro-bridge 36mer のポリペプチドのsynthetic を行った. Molecular モジュールA・Bをdifferent synthesis して-Gly-Pro-でBridge する method ではなく, ペプチド automatic synthesis machine でC-terminal から1-stage でN-terminal まで synthesis した. After purification, the MS has not been confirmed.に、この supramolecular former body をってantigen であるエイズウイルスgp41ペプチドおよびポリフィリンの取り込みをVarious spectroscopic techniques are used to discuss いて検した. CD スペクトルから, gp41 ペプチドは supramolecular front body へのGET り込みがゆっくりしていて,しかも出り込まれた后も、ゆっくりしたコンフォーメーション変化を开こすと presumed された. One party's ポルフィリンはすぐにtakes り込まれ, その后ゆっくりとsuper score子前槆体のコンフォーメーション変化が开こること思われた.このRESULTS はUVスペクトルおよび Surface プラズモン Resonance Method のRESULTS からもsupport された. 3. Supramolecular precursors and antigens are added to the same reaction system, and various conditions are changed and the gp41 disappears and is traced by HPLC. The ポルフィリンにmetal イオンとしてMnを is introduced into the したものを, and the reaction temperature is 50~60ﾟC, and the enzyme activity is dozens of times higher.この时, Mnをcontains まないポルフィリンでは全くactiveを Show さなかった.