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ブタ卵の活性化に伴う表層顆粒反応と透明帯反応の生理・生化学的検討

猪卵活化过程中浅表颗粒反应和透明带反应的生理生化研究

基本信息

批准号：
09760258
负责人：
建本秀樹
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hiroshima Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,体外成熟ブタ卵に直流パルス刺激を与え,括性化後の表層顆粒の開裂と透明帯構成糖タンパクの経時的な変化について検討した。尚,表層顆粒の開裂は10μg/mlFITC標識AHG-Lectinで染色後,共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。一方,透明帯反応に伴う透明帯糖タンパクの変化は,卵細胞質を完全に除去した透明帯にビオチン標識処理を施し,個々の透明帯をSDS-PAGEで泳働した後,ECL法で検出した。更に,透明帯構成糖タンパクの変化に伴う透明帯硬化現象も0.1%タンパク分解酵素(プロテアーゼ)処理による透明帯の消化時間の差異により明らかにした。成熟卵の表層顆粒は卵細胞膜直下に連続的な単層を形成しており,この卵の透明帯にはZP1,ZP2ならびにZP3の三種類の糖タンパクが認められた。一方,活性化刺激を与えた卵においては表層顆粒開裂の進行に伴いFITC蛍光度の減少と,ZP1とZP2のバンドの消失が観察された。しかし,ブタ卵の活性化後における表層顆粒の開裂には長時間を要し,活性化刺激1時間後に9%の卵で完全な表層顆粒の開裂が初めて確認された。同様に,ZP1とZP2の糖タンパクの消失として認められる透明帯の完全な変性には活性化刺激後3.5時間を要した。また,この透明帯構成糖タンパクの変性に伴ってタンパク分解酵素に対する抵抗性も著しく増加した。以上の結果より,活性化後,ブタ卵が表層顆粒の開裂に伴う透明帯反応を完了するには長時間の培養が必要であることが明らかとなった。このことがブタ卵における体外受精での多精子侵入率の著しい増加に関与していると推定された。

In this study, in vitro matured eggs were stimulated by direct current stimulation and the transformation process was carried out when the surface particles of the matured eggs were cracked and the transparent band was formed into a sugar tube. The surface particles were cracked and stained with 10 μg/ml FITC-labeled AHG-Lectin, and then observed using a confocal microscope. On the one hand, the transparent band is reversed and the transparent band sugar is changed, and the egg cytoplasm is completely removed, and the egg cytoplasm is completely removed. After the label processing is done, the transparent SDS-PAGE is processed, and the ECL method is used. More importantly, the clear band composition of sugar can be changed into 0.1% of the clear band hardening phenomenon. The difference in digestion time of the transparent enzyme treated with enzymes is clear. The surface granules of the mature egg are formed directly under the egg cell membrane and the single layer of the egg is formed, and the egg is transparent.明帯にはZP1, ZP2ならびにZP3の三级のsugarタンパクがcognizeめられた. On the one hand, the activation stimulation is related to the cracking of the surface particles of the eggs and the reduction of the FITC luminosity, and the disappearance of the ZP1 and ZP2 light. After activation, the cracking of the surface particles of the egg will not occur for a long time. After 1 period of activation, the cracking of the surface particles of the egg will be completed at 9%, and the cracking of the surface particles will be confirmed at the beginning. In the same way, ZP1 and ZP2 sugar タンパクの disappears and として recognizes められるtransparent 帯のcomplete な変性にはactivation 3.5 hours after stimulation.また,このtransparent band constitutes sugar タンパクの変性に合ってタンパクdegradation enzyme に対するresistant も与しく Increase and add した. The above results show that after activation, the surface particles of the egg are cracked and the transparent band is refractory, and it is necessary to cultivate it for a long time and it is necessary to make it clear and clear.このことがブタ Egg における In vitro fertilization でのPolysperm intrusion rate の中しい Increase plus に关 and していると presumed された.