寄生虫・エキノコックスの糞便内抗原の解析とそれを利用した終宿主診断法の改良と応用

寄生虫和棘球绦虫粪便抗原分析及其终宿主诊断方法的改进和应用

• 批准号: 09760282
• 负责人: 野中 成晃
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760282/
• 关键词: エキノコックス; 多包条虫; 終宿主; 診断; 糞便内抗原; モノクローナル抗体; 人獣共通感染症; 寄生虫

本年度は、新しく多包条虫成虫排泄分泌(ES)抗原に対するマウスモノクローナル抗体(mAbs)を作製し、糞便内抗原検出法へ利用した。mAbsは9種(Em a-Emi)得られ、Em a、hおよびiの3種はIgG1抗体、Em b-gの6種はIgM抗体であった。多種寄生虫抗原との反応性を調べた結果、3つのグループに分けられ(Em a,Em b-g,Em hとi)、Em hとiは多包条虫成虫および成虫ES抗原とのみ強く反応した。ウエスタンブロッティングはどのmAbsもES抗原とスメア状の反応を示し、多包条虫成虫切片の免疫染色ではmAbs(Em a,c,i)はいずれも成虫テグメントおよび虫体周囲の宿主腸管上皮と反応した。これらの反応が抗原の過ヨウ素酸処理によって喪失したことからmAbsの認識抗原が糖であることが示唆された。そこでEm iおよびES抗原に対するポリクローナル抗体(rAb)を用いたサンドイッチELISA法により糞便内抗原の検出を試みたが、感度の低さが問題となった。感度向上のためにアビジン・ビオチン化酵素複合体法を用い、吸着抗体にrAb、一次抗体にEm i、二次抗体にビオチン化anti-mouse IgG(rAb/Em i/b-AntiM)および吸着抗体にEm i、一次抗体に現法で用いられているビオチン化EmA9を用いる検出系を選択した。検出抗原は熱やホルマリンに対して安定であり、1%ホルマリン、熱処理を施して多包条虫卵を失活させたキツネ剖検材料を用いて各系を比較した。rAb/Em i/b-AntiM検出系と現法(rAb/b-EmA9)は同様の陽性検出率を示し、さらにEm iを用いた新しい検出系はいずれも現法で反応のみられる胞状条虫感染犬糞便とは反応せず、特異性に優れていた。いずれの検出系も単包条虫やフォーゲル包条虫感染動物の糞便内抗原の検出が可能で、他のエキノコックスの終宿主診断にも応用できることが示された。

This year, the excretion and secretion of adult worms (ES) were detected by antigen excretion and secretion (ES). Antigen excretion and secretion of adult worms were detected in this year. 9 kinds of mAbs (Em a-Emi) were detected by Elisa, Em a, Em a, Em b murg 6% IgM antibody. The results of multiple parasite antigens reversal test, Em a phagocytosis assay (Embmuri), Em hindi adult worm and adult worm ES antigens showed strong reactivity. The expression of es antigen in mAbs was detected by immunocytochemistry, and the sections of adult worms were stained by immunostaining. MAbs (Em aPhonec. I) was stained with immunostaining. The adult worms were stained with immunostaining. The antigens were detected by antigens. The antigens were instigated by glucosinolates. The antigens were detected by mAbs. The antibody (rAb) was detected by using the Em I

项目成果

Nonaka,N.: "Monitoring of Echinococcus multilocularis infection in red foxes in Shiretoko,Japan,by coproantigen detection" Parasitology. 116(印刷中). (1998)

Nonaka, N.：“通过粪抗原检测监测日本知床红狐的多房棘球绦虫感染”《寄生虫学》116（出版中）。

Sakai, H.: "Coproantigen detection in a survey of Echinococcus multilocularis infection among red foxes, Vulpes vulpes schrencki, in Hokkaido, Japan."Journal of Veterinary Medical Science. 60(5). 639-641 (1998)

Sakai, H.：“日本北海道赤狐 (Vulpes vulpes schrencki) 多房棘球绦虫感染调查中的粪抗原检测。”兽医医学杂志。

Morishima,Y.: "Coproantigen survey for Echinococcus multilocularis prevalence of red foxes in Hokkaido,Japan" Parasitology International. (in press). (1999)

Morishima，Y.：“日本北海道红狐多房棘球绦虫流行情况的粪抗原调查”国际寄生虫学。

Sakai, H.: "Coproantigen detection in a routine fox survey of Echinococcus multilocularis in Hokkaido, Japan."Parasitology International. 47(1). 47-51 (1998)

Sakai, H.：“在日本北海道对多房棘球绦虫进行的常规狐狸调查中检测粪抗原。”寄生虫学国际。

Malgor,R.: "Coproantigen detection in dogs experimentally and naturally infected with Echinococcus granulosus by a monoclonal antibody based enzyme linked immunosorbent assay" International Journal for Parasitology. 27・12. 1605-1612 (1997)

Malgor, R.：“通过基于单克隆抗体的酶联免疫吸附测定实验性和自然感染细粒棘球绦虫的狗的粪抗原检测”《国际寄生虫学杂志》27·12（1997）。