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内皮由来過分極因子の作用メカニズムの解明

阐明内皮源性超极化因子的作用机制

基本信息

批准号：
09770021
负责人：
石川智久
金额：
$ 1.22万
依托单位：
University of Shizuoka (1998)University of Tsukuba (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

モルモット冠動脈においてアセチルコリン(ACh)により内皮細胞から遊離される内皮由来過分極因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor:EDHF)に関する解析を行った。450〜600gの雄性モルモットから左冠動脈回旋枝を摘出し、実験に使用した。張力の測定は、内皮細胞が保存されたリング状標本を作製し、マグヌス法により行った。内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の測定は、Fluo3を導入した血管条片を共焦点レーザー顕微鏡で観察することにより行った。また、コラゲナーゼ処理により得られた単一血管平滑筋細胞を用いて、パッチクランプ法により全細胞K^+電流を測定した。small-およびlarge-conductance Ca^<2+>-activatedK^+ channelsの阻害薬であるapaminおよびiberiotoxinは、EDHFによる弛緩反応に全く影響しなかった。一方、同じくlarge-conductance Ca^<2+>-activated K^+ channelsの阻害薬として知られているcharybdotoxinは、AChの濃度-反応曲線を右方にシフトさせ、さらに、apaminとcharybdotoxin共存下では、EDHFによる弛緩反応は完全に消失した。また、AChによる内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇にはapamin+charybdotoxinは影響しなかったことから、apamin+charybdotoxinが内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度上昇を抑制することによりEDHF遊離を抑制したのではないことが示唆された。一方、チトクロームP450の阻害薬として汎用されているproadifenは、EDHFによる弛緩反応を完全に抑制したが、単一細胞を用いた全細胞電流測定実験から、proadifenが血管平滑筋の電位依存性K^+チャネルを直接抑制することも明らかとなり、proadifenはDHFがチトクロームP450代謝産物であるepoxyeicosatrienoic acid(EET)であるか否かを判定する道具としては不適当であることがわかった。以上の結果から、EDHFの効果発現にはapamin+charybdotoxinより抑制されるK^+チャネルが関与しており、少なくともモルモット冠動脈におけるEDHFはEETではないことが示唆された。

The analysis of endothelium-derived hyperpolarizing factor (EDHF) related to endothelial cell dissociation in the coronary artery (ACh). 450 ~ 600g male coronary artery circumflex branch is plucked and used. Tension-measuring and endothelial cell preservation methods Measurement of intracellular Ca^<2+> concentration in endothelial cells, introduction of Fluo3, confocal microscopy, and observation The whole cell K^+ current was measured by the method of "blood vessel smooth muscle" Small-and large-conductance Ca^<2+>-activatedK^+ channels are blocked by apamin and iberiotoxin, and EDHF is relaxed and anti-inflammatory. In one direction, the same large-conductivity Ca^<2+>-activated K^+ channels were detected in charybdotoxin and ACh concentration-inversion curves were detected in charybdotoxin and ACh concentrations in charybdotoxin. The increase of intracellular Ca ^<2 +> concentration in endothelial cells was inhibited by apamin+charybdotoxin and the increase of intracellular Ca^<2+> concentration in endothelial cells was inhibited by apamin+charybdotoxin. The inhibition of P450 in a single cell is completely inhibited by proadifen and EDHF in a single cell. Whole-cell current measurement is performed by proadifen and the potential-dependent K^+ cell growth is directly inhibited by proadifen. Proadifen is a metabolite of DHF CTORUM P450, but epoxyeicosatrienoic acid(EET) is not appropriate. The above results show that EDHF has the effect of inhibiting the growth of K^+ cells in the coronary artery and EDHF has the effect of inhibiting the growth of EET in the coronary artery.