分裂酵母をモデル系とした真核生物のG1/S期制御機構の解析

以裂殖酵母为模型系统分析真核G1/S期控制机制

• 批准号: 09770070
• 负责人: 田中 晃一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770070/
• 关键词: 分裂酵母; 増殖; 細胞周期; DNA複製; ストレス; Cdc2キナーゼ; Spt1; Cdc24; G1; S期; サイクリン; 分化

1. sptl^+遺伝子の機能解析:sptl^+遺伝子産物はDNA複製前複合体と相互作用してS期を制御することが示されている。今年度は更に、G2/M期進行に欠損を示すcdc2ts、cdc13ts、cdc25ts変異がsptl^+遺伝子の過剰発現により抑圧されること、Δsptl cdc25ts二重変異株が合成致死となることを発見した。このことは、SptlはG2期におけるCdc2キナーゼの活性制御にも必要であり、より広範な細胞周期制御に関与することを示唆している。また、sptl破壊株はストレスによる増殖抑制を解除できない表現型を示すが、その際の増殖停止はG2期でおこる。Cdc2キナーゼを再活性化できないことが増殖停止の原因である可能性が高いが、野生型株とsptl破壊株との間でCdc2キナーゼのチロシン残基のリン酸化レベルに差がないこと、sptl破壊株の表現型がcdc2の活性化型変異によって抑圧されないことから、Sptlはリン酸化以外の制御機構でCdc2の活性を調節していると考えられる。GFP融合タンパクを用いて細胞内局在性を観察したところ、Sptlは核膜に存在した。現在、SptlがCdc2やCdc13の局在に影響を与えている可能性について検討中である。2. cdc24^+遺伝子の機能解析:sptl^+と強く遺伝学的な相互作用を示すcdc24^+遺伝子について解析を進め、S期の完了に必須の役割を担っていることを明らかにした。また、cdc24変異の多コピー抑圧遺伝子としてPCNAとRFCのlarge subunitをコードする遺伝子を単離した。免疫沈降の実験により、これら3種のタンパク質は細胞内で複合体を形成していることが示されたことから、Cdc24はDNA複製装置の一員として機能している可能性が示唆された。

1. Function analysis of sptl^+ gene:sptl^+ gene products interact with DNA pre-replication complexes and control DNA replication in S phase. This year, the G2/M period is under construction, and the loss shows that cdc2 ts, cdc13 ts, and cdc25 ts are different from sptl^+ gene. The cell cycle control system is essential for cell cycle control. The expression of phenotype, growth inhibition and G2-phase growth inhibition of sptl and sptl strains were analyzed. Cdc2 reactivation is highly likely to cause the cessation of proliferation, whereas wild-type and sptl strains have different phenotypes for cdc2 reactivation and Sptl reactivation. The regulatory mechanisms for cdc2 reactivation are regulated. GFP fusion is used to detect the existence of nuclear membrane in cells. Now, Sptl Cdc2 Cdc13 2. cdc24^+ gene function analysis:sptl^+ strong genetic interaction, cdc24^+ gene analysis progress, S period is over, necessary service cut, clear cut Cdc24 has a large subunit of PCNA. The possibility of the formation of intracellular complexes of three kinds of proteins in the immune system was demonstrated. Cdc24 was a member of the DNA replication apparatus.

项目成果

田中 晃一: "転写因子と細胞周期" 臨床医. 23・5. 85-89 (1997)

田中浩一：“转录因子和细胞周期”临床医生 23・5。

Tahara,S.: "Functional domains of Rep2,a transcriptional activator subunit for Res2-Cdc10,controlling the cell cycle “start"" Mol.Biol.Cell.Vol.9. 1577-1588 (1998)

Tahara, S.：“Rep2 的功能域，Res2-Cdc10 的转录激活亚基，控制细胞周期“启动””Mol.Biol.Cell.Vol.9. 1577-1588 (1998)

Tanaka,H.: "Fission yeast Cdc2 is a replication factor C-and proliferating cell nuclear antigen-interacting factor essential for S phase completion" Mol.Cell.Biol.Vol.19. 1038-1048 (1998)

Tanaka, H.：“裂殖酵母 Cdc2 是复制因子 C 和增殖细胞核抗原相互作用因子，对于 S 期完成至关重要”Mol.Cell.Biol.Vol.19。

Horie,S.: "The Schizosaccharomyces pombe mei4^+ gene encodes a meiosis-specific transcription factor containing a forkhead DNA-binding domain" Mol.Cell.Biol.Vol.18. 2118-2129 (1998)

Horie,S.：“粟酒裂殖酵母 mei4^ 基因编码包含叉头 DNA 结合域的减数分裂特异性转录因子”Mol.Cell.Biol.Vol.18。

田中 晃一: "酵母ラボマニュアル(山本正幸・大矢禎一 共編)" シュプリンガー・フェアラーク東京, 270-280 (1998)

Koichi Tanaka：“酵母实验室手册（由 Masayuki Yamamoto 和 Teiichi Oya 共同编辑）” Springer Verlag Tokyo，270-280 (1998)