in situ RT-PCR法を用いた接着分子およびプロテアーゼmRNAの局在観察

原位RT-PCR法对粘附分子和蛋白酶mRNA的定位观察

• 批准号: 09770118
• 负责人: 川島 篤弘
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770118/
• 关键词: インテグリン; 胃癌; RT-PCR; in situ hybridization

(1)RT-PCRによる検討。進行胃癌組織30例と非癌部胃粘膜組織20例について、胃癌組織と非癌部組織での各サブユニットの発現率をRT-PCR法で調べるとαv、β6、β8は癌組織で有意に発現率が高かった。β5は、癌部で高い傾向が見られたが、統計学的有意差は認められなかった(p=0.0582)。(2)競合RT-PCR法による検討。PCR競合鋳型合成キットを用いて、574塩基対からなる癌遺伝子v-erbBのDNA断片から、両端にβ5のプライマーの配列を含む240塩基対の競合鋳型を作成した。この競合鋳型をサンプルに等量混ぜることによってサンプル内のβ5の定量が可能であった。定量的検索が可能であった進行胃癌組織21例と非癌部胃粘膜組織10例について、β5は癌部で140倍多く発現していた。(3)in situ hybridizationによる検討。組織切片上でβ5がどの程度発現しているかを調べるためにin situ hybridizationを施行した。対象は、手術がなされた胃癌患者の術前の胃生検組織(10%中性緩衝ホルマリン固定パラフィン包埋切片)65例で、まずこれらの症例をmRNA全量を反映するd(T)20 oligonucleotideの発現を検討し、mRNAがよく保存されていることを確認した。プローブは、PCRでジゴキシゲニン標識したDNAプローブを用いた。陽性細胞の割合からβ5の陽性スコアを算出すると、癌部で有意に高いスコアが得られた。(4)まとめ。αvβ5はビトロネクチンをリガンドとするインテグリンである。これまでのところモノクローナル抗体を用いたPLP固定パラフィン切片での免疫組織化学的検討でスキラス型胃癌においてβ5が陽性になる傾向が示されている(Kawahara et al.Pathol.Int.45:493-500,1995)。本研究でも競合RT-PCR法とin situ hybridizationを用いた検討で、β5が胃癌に高発現していることが確かめられた。

(1)RT-PCR detection. 30 cases of gastric cancer tissues and 20 cases of non-cancerous gastric mucosa tissues were detected. The detection rate of each tissue in gastric cancer tissues and non-cancerous tissues was adjusted by RT-PCR. The detection rate of αv, β6 and β8 in cancerous tissues was high.β5, cancer, high tendency, statistical intentional difference, p=0.0582. (2)The detection method of RT-PCR was established. PCR co-type synthesis of DNA fragments from cancer vector v-erbB using 574 bp pairs and co-type synthesis of DNA fragments from β5 bp pairs containing 240 bp pairs This kind of competition and competition makes it possible to quantify β5 in the server by mixing equal amounts. Quantitative detection was possible in 21 cases of gastric cancer tissue and 10 cases of non-cancerous gastric mucosa tissue, and 140 times of β5 was found in cancerous tissue. (3)in SITU HYBRIDIZATION is a new approach. The degree of β5 in tissue sections was observed in situ hybridization. 65 gastric biopsy specimens (10% neutral buffer fixed sections) from patients with gastric cancer before surgery were examined for mRNA expression in d(T)20 oligonucleotide and mRNA preservation. The first step is to identify the DNA sequence. The positive cells were cut off and the positive cells were calculated. The cancer was intentionally high. (4)まとめ。αvβ5はビトロネクチンをリガンドとするインテグリンである。Immunohistochemical examination of PLP-fixed sections of gastric cancer specimens showed a tendency to be positive for β5 (Kawahara et al. Pathol. Int. 45:493- 500, 1995). In this study, RT-PCR and in situ hybridization were used to detect and detect high incidence of gastric cancer.