BrdU標識細胞の近紫外線照射法による新しい個体内造血幹細胞動態の解析法

一种利用 BrdU 标记细胞的近紫外线照射分析个体内造血干细胞动力学的新方法

• 批准号: 09770161
• 负责人: 鈴木 容子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770161/
• 关键词: 造血幹細胞; 細胞動態解析法; ブロモテオキシユリジン; 近紫外線; ブロモデオキシユリジン

本研究の目的は以下2部に大別される。即ち、1)造血幹/前駆細胞の動態解析法として、新たに近紫外線照射ブロモデオキシュリジン(BrdU)標識細胞殺傷法(BUUV法)の樹立をはかること、2)その方法を用いて、各種遺伝子変異動物(ρ53欠失マウス、他)の造血幹細胞/前駆細胞の細胞動態解析を行うことである。本年度はそれぞれについて概略、下記の通り進めた。まず1)に関しては、GM-CSF添加培養性コロニー形成造血前駆細胞について検討を重ね、ほぼ安定した結果を得るに至った。尚、BrdUの標識方法において、個体投与とin vitro投与による標識を比較した結果、in vitro標識では、37ﾟC30分間の孵置時間内に人為的に新たに細胞回転に入る分画が存在し、その結果不当に細胞回転内分画が大きくなることが明らかとなった。即ち、これまでトリチウムチミジン自殺試験法によって得られてきた造血幹・前駆細胞の細胞回転分画の計測結果も同様のartifactを含むことを意味する。今後、こうした視点から従来の結果の再検討を進めたい。次に、2)に関しては、p53遺伝子欠失マウスの造血前駆細胞動態について、2-1)定常状態と、2-2)白血病誘発性化学発がん物質としてベンゼンの暴露状態下での解析を行った。2-1)定常状態;培養性造血前駆細胞では、ワイルドに比べて単位時間あたりの細胞回転分画が大きくBrdUを取り込む細胞分画の増加は緩徐だが、プラトーレベルには差異を認めなかった。2-2)ベンゼン墨露:5日/週×2週のベンゼン吸入暴露の最中にBrdU標識した結果、ワイルドの造血前駆細胞動態がほぼ完全に抑制されていることが明らかとなった。この抑制はp53欠失マウスを用いた場合には観察されなかったことから、ワイルドでの細胞動態抑制にはp53分子が関与していることが示唆される。今後ここに関与する分子の解析を進める予定である。結果の一部は 米国血液学会(マイアミ・米国、12月4〜8日、1998年)、日本毒科学会(名古屋6月17〜19日、1998年)などで発表した。1

The purpose of this study is to study the following two aspects. 1) Dynamic analysis of hematopoietic stem cells/progenitor cells by near-ultraviolet irradiation (BrdU) and cell killing method (BUUV method); 2) Dynamic analysis of hematopoietic stem cells/progenitor cells by different genetic animals. This year's annual report is summarized in the following paragraphs. 1) The results of the study and the stability achieved when GM-CSF was added to cultured guanine to form hematopoietic progenitor cells. In addition, BrdU identification method, individual investment and in vitro investment, identification results, in vitro identification, 37 ° C30 minutes incubation time, artificial new cell return, identification results, improper cell return, identification results, identification results. That is, the measurement results of hematopoietic stem cells and progenitor cells in the suicide assay are the same as those in the artifact. From now on, the viewpoint of the future and the results of the future will be discussed again. 2) Analysis of leukemia-inducing chemicals under exposure conditions. 2-1)Steady state; cultured hematopoietic progenitor cells are divided into large and small groups according to the time of cell cycle. 2-2) Exposure:5 days/week ×2 weeks exposure to inhalation exposure to BrdU marker results, complete inhibition of hematopoietic progenitor cell dynamics, and complete inhibition of hematopoietic progenitor cell dynamics. The inhibition of p53 in the absence of the use of the enzyme in the detection of cell dynamics In the future, the molecular analysis of the relationship will be carried out. The results were published by the American Society of Hematology (Japan, December 4 - 8, 1998) and the Japanese Society of Toxicology (Nagoya, June 17 - 19, 1998). 1

项目成果

Hirabayashi Y.: "Cell kinetics of hemopoietic colony-forming units in spleen(CFU-S)in young and old mice"Mechanisms of Ageing and Development. 101. 221-231 (1998)

Hirabayashi Y.：“年轻和年老小鼠脾脏中造血集落形成单位（CFU-S）的细胞动力学”衰老和发育的机制。

平林容子: "新技術の毒性学への応用、造血幹細胞動態解析法-BUUV法" The Journal of Toxicological Sciences. 23(2). App.51-61 (1998)

Yoko Hirabayashi：“新技术在毒理学中的应用，造血干细胞动态分析方法-BUUV方法”《毒理学杂志》App.51-61（1998）。

Sasaki H: "A fraction unresponsive to growth inhibition by TGF-beta among the high-proliferative potential progenitor cells in bone marrow of p53- deficient mice." Leukemia. 11. 239-244 (1997)

Sasaki H：“p53 缺陷小鼠骨髓中高增殖潜力祖细胞中，有一部分对 TGF-β 的生长抑制无反应。”

Hirabayashi Y: "The p53-deficient hemopoietic stem cells: their resistance to radiation- apoptosis,but lasted transiently." Leukemia. 11(S3). 489-492 (1997)

Hirabayashi Y：“p53 缺陷的造血干细胞：它们对辐射的抵抗力 - 细胞凋亡，但持续时间短暂。”

Hirabayashi Y: "Cell kinetics of hemopoietic colony-forming units in spleen(CFU-S)in young and old mice." Mechanisms of Ageing and Development. (in press).

Hirabayashi Y：“年轻和年老小鼠脾脏中造血集落形成单位 (CFU-S) 的细胞动力学。”