耐熱性エンテロトキシン受容体のC末端領域の機能

热稳定肠毒素受体C末端区域的功能

• 批准号: 09770187
• 负责人: 和田 昭裕
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770187/
• 关键词: heat-stable enterotoxin; guanylyl cyclase

毒素原性大腸菌の産生する耐熱性エンテロトキシン(STa)は、腸管上皮細胞膜上に存在する受容体蛋白質(STaR/GC-C)に特異的に結合して、ヒトや家畜に急性の下痢を引き起こす毒素である。他のほ乳類の膜結合型グアニル酸シクラーゼと比べて、STaRはグアニル酸シクラーゼ領域より下流のC末端領域が他の膜結合型グアニル酸シクラーゼより長いといった構造上の特徴を持っている。STaRは、NPR-A(GC-A)もしくはNPR-B(GC-B)と比べてC末端領域が約60アミノ酸長く、GC-D、retGC1(GC-E)もしくはretGC2(GC-F)と比べてもC末端領域が約30アミノ酸長いといった特徴が認められる。この特徴あるSTaRのC末端領域の欠損させたSTaR変異体、つまり1015残基めのグルタミンから1050残基めのフェニルアラニンまで欠損させたCΔ1015を作製した。このCΔ1015を1μMSTaにて10分間刺激した結果、wild-typeSTaRと比べて約20倍高い細胞内cGMP濃度上昇が認められた。wild-typeSTaRとCΔ1015の蛋白質の発現量を免疫沈降にて調べた結果、同程度の発現量が認められた。また、STa結合活性を調べた結果、wild-typeSTaRの結合定数(Kd=6.0nM)とCΔ1015の結合定数(Kd=6.8nM)は、ほぼ同じ値を示した。従って、C末端領域を欠損したCΔ1015が高いGC活性を示すことは、STaRのC末端領域がGC活性に抑制的に働いてることを示唆していた。また、STaによるGC活性化を調べた結果、wild-typeSTaRのGC活性化はEC_<50>が780nMであるのに対して、CΔ1015のそれは59nMであり、CΔ1015のGC活性化のEC_<50>の値がwild-typeSTaRに比べて低い濃度であることがわかった。

Toxin-producing E. coli produces heat-resistant proteins (STa) that bind specifically to receptor proteins (STaR/GC-C) present on intestinal epithelial cell membranes and induce acute diarrhea in livestock. The structural characteristics of the membrane-bound type of his milk are maintained in the C-terminal region of the downstream region of his milk. STaR, NPR-A(GC-A), NPR-B(GC-B), GC-D, retGC1(GC-E), retGC 2(GC-F), retGC2(GC-F), etc. This feature is characterized by the absence of STAR in the C-terminal region, the presence of STAR variants, residues 1015, 1050, and the absence of STAR CΔ1015. CΔ1015 ± 1μ M STa ± 10 min stimulation results, wild-type STa ± 20 times higher than that ± 10 min, intracellular cGMP concentration increased significantly. Wild-type STaR and CΔ1015 protein expression levels were measured by immunoprecipitation. The results of STa binding activity modulation, wild-type STaR binding constant (Kd= 6.0 nM) and CΔ1015 binding constant (Kd= 6.8 nM) are shown below. CΔ1015 shows high GC activity in the C-terminal region, and C Δ1015 shows high GC activity in the C-terminal region. GC activation of wild-type STaR <50>was 780nM, CΔ1015 was 59nM, and GC activation of C Δ 1015 <50>was lower than that of wild-type STaR.

项目成果

N.Ohmori et al.: "The enhancing effect of anionic α-helical peptide on catlonic peptide-mediating transfection systems" Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 726-729 (1997)

N. Ohmori 等人：“阴离子 α-螺旋肽对阳离子肽介导的转染系统的增强作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.235 (1997)。

Miyuki Kimura et al.: "Vacuolating cytotoxin purified from Helicobacter pylori causes mitochondrial damage in human gastric cells." Microb.Pathog.26. 45-52 (1999)

Miyuki Kimura 等人：“从幽门螺杆菌中纯化的空泡细胞毒素会导致人胃细胞线粒体损伤。”

Naoya Ohmori et al.: "Importance of hydrophobic region in amphiphilic structures of α-helical peptides for their gene transfer-ability into cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.245. 259-265 (1998)

Naoya Ohmori 等人：“α-螺旋肽的两亲结构中的疏水区域对于其基因转移到细胞中的能力的重要性。”Biochem.Biophys.Res.Commun.245 (1998)。

Hiroshi Nagata et al.: "Application of Bead-ELISA method to detect Helicobacter pylori VacA." Microb.Pathog.26(印刷中). (1999)

Hiroshi Nagata 等人：“应用 Bead-ELISA 方法检测幽门螺杆菌 VacA。”（正在出版）。

K.Yahiro et al.: "Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin binds to the 140-kDo protein in human gastric cancer cell lines,AZ-521 and AGS" Biochem.Biophys.Res.Commun.238. 629-632 (1997)

K.Yahiro 等人：“幽门螺杆菌空泡细胞毒素与人胃癌细胞系 AZ-521 和 AGS 中的 140-kDo 蛋白结合”Biochem.Biophys.Res.Commun.238。