未熟B細胞アポトーシスシグナル関連p160分子の構造解析

未成熟B细胞凋亡信号相关p160分子的结构分析

• 批准号: 09770222
• 负责人: 坂田 敦子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770222/
• 关键词: 未熟B細胞; アポトーシス; p160; チロシンキナーゼ; チロシンホスファターゼ; SIG 1

我々は、これまでマウスBCR複合体を形成するMB-1(Ig-α)およびMB-1と会合する分子の解析を行い、未熟B細胞と成熟B細胞のシグナル伝達の違いを明かにする手掛かりのある分子pl60を見い出している。pl60の分子は種々のセリン/スレオニンキナーゼやチロシンキナーゼと結合しており、成熟B細胞株BAL17においてはBCR刺激後30秒でpl60の複合体中の分子のリン酸化が上昇するが、一方未熟B細胞株WEHI-23lでは逆に刺激後30秒で複合体中のリン酸化が消失することから、このリン酸化の変化はチロシンホスファターゼと特異的キナーゼ分子の相互作用によりB細胞レセプターの伝達するシグナルをコントロールしていることが示された。本年度の研究はSIGlが認識する分子をコードする遺伝子の単離及び構造解析であった。まず、.これまでに、N末端の20個のアミノ酸シークエンスを決定しているので、それに基づきdegenerate primerを作製し、PCRによってDNA断片を回収することを試みた。予想されるサイズのバンドが検出でき、そのDNAシークエンスを行った。この遺伝子の産物がSIGlの認識する分子であるかについてはまだ確定していない。次に、抗体スクリーニングによる遺伝子単離を行った。λgt11-spleen cDNA library及びλgt11-liver cDNA libraryの100万クローンをβ-galactosidaseとの融合タンパクとして発現させ、SIGlによってイムノスクリーニングを行った。得られたcDNAクローンの解析を行っているが、該当のクローンであるかどうかは断定できていない。更に、pEF-BOSを用いた発現クローニングと免疫染色を組み合わせた方法による遺伝子単離を試みている。

I 々 は, こ れ ま で マ ウ ス BCR complex を form す る MB - 1 (Ig - alpha) お よ び MB - 1 meet と す る molecular の を い, unripe B cells と mature B cells の シ グ ナ ル 伝 da の violations い を Ming か に す る hands hang か り の あ る molecular pl60 を see い out し て い る. Pl60 の molecular は kind 々 の セ リ ン / ス レ オ ニ ン キ ナ ー ゼ や チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ と combining し て お り, mature B cell lines BAL17 に お い て は BCR stimulus after 30 seconds で pl60 の の molecule in the complex の リ ン acidification が rise す る が, one party unripe B cell lines WEHI - 23 l で は で compound inverse に stimulation after 30 seconds Body の リ ン acidification が disappear す る こ と か ら, こ の リ ン acidification の variations change は チ ロ シ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ と specific キ ナ ー ゼ molecular の interaction に よ り B cells レ セ プ タ ー の 伝 da す る シ グ ナ ル を コ ン ト ロ ー ル し て い る こ と が shown さ れ た. This year's <s:1> research focuses on <s:1> SIGlが to understand the する molecule をコ ドする ドする derivative 伝 単 separation and び structural analysis であった. ま ず,. こ れ ま で に, N terminal の 20 の ア ミ ノ acid シ ー ク エ ン ス を decided し て い る の で, そ れ に base づ き degenerate primer を as し, PCR に よ っ て DNA fragment を back 収 す る こ と を try み た. To want to さ れ る サ イ ズ の バ ン ド が 検 out で き, そ の DNA シ ー ク エ ン ス を line っ た. Product こ の posthumous son 伝 の が SIGl の know す る molecular で あ る か に つ い て は ま だ determine し て い な い. に, antibody ス ク リ ー ニ ン グ に よ る heritage 伝 son 単 line from を っ た. Lambda gt11 - striking cDNA library and び lambda gt11 - liver cDNA library の 1 million ク ロ ー ン を beta - galactosidase と の fusion タ ン パ ク と し て 発 now さ せ, SIGl に よ っ て イ ム ノ ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. Have ら れ た cDNA ク ロ ー ン の parsing line を っ て い る が, should の ク ロ ー ン で あ る か ど う か は concluded that で き て い な い. More に, pEF - BOS を with い た 発 now ク ロ ー ニ ン グ と immune dyeing を group み close わ せ た method に よ る heritage 伝 son 単 from を try み て い る.

项目成果

Y.Matsuo, R.A.F.MacLeod, K.Kojima, K.Kuwahara, A.Sakata, H.G.Drexler,: "A novel ALL-L3 cell line, BALM-16, lacking expression of immunoglobulin chains derived from a patient with hypercalcemia." Leukemia,. 11. 2168-2174 (1997)

Y.Matsuo、R.A.F.MacLeod、K.Kojima、K.Kuwahara、A.Sakata、H.G.Drexler：“一种新型 ALL-L3 细胞系 BALM-16，缺乏来自高钙血症患者的免疫球蛋白链的表达。”

S.inui, A.SAkata, K.Maeda, F.Tashiro, J.Miyazaki, N.Sakaguti: "Introduction of human CD40 gene with immunoglobulin enhancer and promoter creates mice with a population of human CD40+ early B lineage cells in the bone marrow" Transgenic Res.(in press). (19

S.inui、A.SAkata、K.Maeda、F.Tashiro、J.Miyazaki、N.Sakaguti：“引入具有免疫球蛋白增强子和启动子的人类 CD40 基因，在小鼠的骨骼中产生了一群人类 CD40 早期 B 谱系细胞

S.Mitsuyoshi, H.Igarashi, A.Sakata, H.Koseki, M.Taniguchi and N.Sakaguchi: "Expression of the proliferation-related Ki-67 mRNA in the early development of murine embryo." Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 191-196 (1997)

S.Mitsuyoshi、H.Igarashi、A.Sakata、H.Koseki、M.Taniguchi 和 N.Sakaguchi：“小鼠胚胎早期发育中增殖相关的 Ki-67 mRNA 的表达”。

S.Yamanouch, K.Kuwahara, A.Sakata, S.Hirose and N.Sakaguchi,: "A T cell activation antigen, Ly6C, induced on CD4+ Thl cells mediates an inhibitory signal for secretion of IL-2 and proliferation in peripheral immune responses" Eur.J.Immunol.,. (in press).

S.Yamanouch、K.Kuwahara、A.Sakata、S.Hirose 和 N.Sakaguchi，：“CD4 Thl 细胞上诱导的 T 细胞活化抗原 Ly6C 介导外周免疫反应中 IL-2 分泌和增殖的抑制信号