ニューキノロン系薬剤耐性結核菌の遺伝子変異と迅速検出法の開発

新型喹诺酮类耐药结核杆菌基因突变及快速检测方法的开发

• 批准号: 09770293
• 负责人: 田丸 亜貴
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770293/
• 关键词: 結核菌; ニューキノロン系薬剤; オフロキサシン; gyrA; 薬剤耐性; DNA gyraseA

前年度に引き続き、オフロキサシン(OFLX)耐性とDNA gyrase Aサブユニットをコードする遺伝子(gyrA)の変異の関係を明らかにするため、OFLX耐性結核菌臨床分離株3株(MIC≧2.0μg/ml)と感受性株18株についてgyrAの配列を調査した。OFLX耐性株では、全ての菌株のgyrAに1箇所または2箇所の変異がみられた。変異の部位は、23株中16株がコドン94、6株がコドン90、1株がコドン91であった。変異の種類は、コドン90とコドン91ではそれそれ1種類(Ala-90→Val、Ser-91→Pro)、コドン94では5種類(Asp-95→Val、Asn,.Gly..Ala、Tyr)であった。耐性株3株のOFLXに対するMICは2.0〜16μg/ml以上に分布していたが、MIC値と変異の部位や種類には相関は認められなかった。OFLX耐性株3株中18株でコドン95にも1種類の変異(Ser-95→Thr)がみられたが、この変異はOFLX感受性株でも18株中17株にみられた。また、この変異の有無とOFLXに対するMIC値や他の抗結核薬に対する耐性に相関は認められなかった。したがって、コドン95での変異は結核菌臨床分離株に高率に認められるが耐性に関与しない変異であり、コドン90、91、94での変異がOFLX耐性に伴うものと考えられた。これらの変異の迅速検出法については、PCR-RFLP法やSSCP等を現在検討中である。持続排菌結核患者の治療にはニューキノロン系薬剤が使用されることがあり、治療中の耐性化が問題となる。現在、ニューキノロン系薬剤投与および非投与の持続排菌患者19名から採取した結核菌株45株について、OFLXに対するMIC測定とgyrA変異の検出を行い、ニューキノロン系薬剤投与期間と耐性化の関係を調査しているところである。

从上一年开始，为了阐明编码DNA Gyrase A亚基（Gyra）的基因中的氧氟沙星（OFLX）耐药性与突变之间的关系，研究了三种抗LX抗性结核病结核病临床分​​离株（MIC麦克风2.0-2.0μg/ml）和18。在抗LX抗性菌株中，在Gyra中观察到一个或两个突变。突变的位点是23个菌株中16个的密码子94，密码子为60株为6，密码子91为1。密码子90和密码子91和密码子91（ALA-90→Val，Ser-91→Pro）有一种突变类型，CODON 94（ASP-95→Val→Val，Assn，assn，aa aa，aa，codon 94（code）的突变类型。在2.0至16μg/ml或更高的情况下分布了三种抗性菌株中OFLX的麦克风，但是在MIC值与位点或突变类型之间未观察到相关性。在3个抗LX抗性菌株中的18种中，在密码子95中也看到了一个突变（SER-95→THR），但是在18个OFLX敏感性菌株中的17个中可以看到该突变。此外，在这种突变的存在或不存在MIC水平与OFLX或对其他抗结核药物的抗性之间没有发现相关性。因此，在结核分枝杆菌的临床分离株中高度观察到密码子95的突变，但没有参与耐药性，而密码子90、91和94的突变被认为与OFLX抗性有关。为了快速检测这些突变，目前正在考虑PCR-RFLP方法和SSCP。 Newquinolone药物可用于治疗持续性细菌性结核病患者，并且治疗期间的耐药性成为问题。目前，正在研究了19例新喹诺酮类药物和非辅助患者的45例结核病菌株，正在研究针对OFLX和检测GYRA突变的MIC测量，并正在研究新奎诺酮药物给药的持续时间与抵抗的发展之间的关系。

项目成果

鈴木定彦: "結核菌の薬剤耐性検査 薬剤耐性に関与する遺伝子と迅速診断への応用の可能性" 臨床と微生物. 25・6. 795-801 (1998)

Sadahiko Suzuki：“结核分枝杆菌的耐药性测试：与耐药性相关的基因及其应用于快速诊断的可能性”《临床和微生物学》25・6（1998）。

Chihiro Katsukawa: "Chracterization of the rpsL and rrs genes of streptomycin-resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis in Japan." Journal of Applied Microbiology. 83. 634-640 (1997)

Chihiro Katsukawa：“日本结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株的 rpsL 和 rrs 基因的表征。”

Yasuhiko Suzuki: "Detection of kanamycin-resistant Mycobacterium tubercuiosis by identifying mutation in the 16S rRNA gene." Journal of Clinical Microbiology. 35・5. 1220-1225 (1998)

Yasuhiko Suzuki：“通过识别 16S rRNA 基因突变检测卡那霉素耐药性结核分枝杆菌。”临床微生物学杂志 35・5（1998）。