uPA/uPARシステムの膵癌浸潤転移への関与

DNA Transfection:ヒト膵癌から得られた細胞株MIA PaCa-2細胞を10%FBS含有DMEM培地にて継代維持保存した。u-PAR cDNAをmammalian expression vector pcDNA3.1 Vectorsにサブクローンし、large prep.法にて回収し、これをLipofection法によりMIA PaCa-2細胞にtransfectした。得られた細胞をクローニングして、ウエスタン法によりu-PAR高発現株MIA PaCa-2 u-PAR-hとu-PAR低発現株MIA PaCa-2 u-PAR-1、さらにneo耐性遺伝子のみを導入したMIA PaCa-2 u-PAR-0を継代した。In Vitro Invasion Assay:Transwell cell chamberに8μm-pore sizeのpolycarbonate filterを組込みMatrigelをコーテイング、上室に癌細胞を入れInvasion Assayを行なった。filter下面に浸潤した癌細胞数を光顕下に計測したところ、MIA PaCa-2 u-PAR-hがMIA PaCa-2 u-PAR-1やMIA PaCa-2 u-PAR-0に比べ浸潤細胞数が多い傾向が認められたが有意な差は認められなかった。Orthotopic Transplantation:5〜6週齢のBALB/cマウスに3種類のTransfectantを10^7個/1mlに調製し、皮下に注入した。3〜4週間後腫瘍が生着し約1cm大になったところで取り出し、一部を3×3×3mmにして、別のBALB/cマウスの膵に移植した。残りを固定し観察したところMIA PaCa-2 u-PAR-hが作る腫瘍は皮下から、筋層への浸潤がより強い傾向が伺われた。膵への移植は、生着率がMIA PaCa-2 u-PAR-hが3/10、MIA PaCa-2 u-PAR-1が2/9、MIA PaCa-2 u-PAR-0が3/8で、MIA PaCa-2 u-PAR-h1例で肺転移が検出された。また組織学的にはMIA PaCa-2 u-PAR-hが周囲膵組織へ浸潤度や、静脈浸潤、リンパ管浸潤などが他の2つのTransfectantよりやや強い傾向が伺われ、今後Nを増やして検討する必要が考えられた。

DNA Transfection:ヒト膵癌から得られた細胞株MIA PaCa-2細胞を10%FBS含有DMEM培地にて継代維持保存した。u-PAR cDNAをmammalian expression vector pcDNA3.1 Vectorsにサブクローンし、large prep.法にて回収し、これをLipofection法によりMIA PaCa-2細胞にtransfectした。得られた細胞をクローニングして、ウエスタン法によりu-PAR高発現株MIA PaCa-2 u-PAR-hとu-PAR低発現株MIA PaCa-2 u-PAR-1、さらにneo耐性遺伝子のみを導入したMIA PaCa-2 u-PAR-0を継代した。In Vitro Invasion Assay:Transwell cell chamberに8μm-pore sizeのpolycarbonate filterを組込みMatrigelをコーテイング、上室に癌細胞を入れInvasion Assayを行なった。filter下面に浸潤した癌細胞数を光顕下に計測したところ、MIA PaCa-2 u-PAR-hがMIA PaCa-2 u-PAR-1やMIA PaCa-2 u-PAR-0に比べ浸潤細胞数が多い傾向が認められたが有意な差は認められなかった。Orthotopic Transplantation:5〜6週齢のBALB/cマウスに3種類のTransfectantを10^7個/1mlに調製し、皮下に注入した。3〜4週間後腫瘍が生着し約1cm大になったところで取り出し、一部を3×3×3mmにして、別のBALB/cマウスの膵に移植した。残りを固定し観察したところMIA PaCa-2 u-PAR-hが作る腫瘍は皮下から、筋層への浸潤がより強い傾向が伺われた。膵への移植は、生着率がMIA PaCa-2 u-PAR-hが3/10、MIA PaCa-2 u-PAR-1が2/9、MIA PaCa-2 u-PAR-0が3/8で、MIA PaCa-2 u-PAR-h1例で肺転移が検出された。また組織学的にはMIA PaCa-2 u-PAR-hが周囲膵組織へ浸潤度や、静脈浸潤、リンパ管浸潤などが他の2つのTransfectantよりやや強い傾向が伺われ、今後Nを増やして検討する必要が考えられた。