膵の分化を誘導する遺伝子及びその情報伝達系の解明

阐明诱导胰腺分化的基因及其信息转导系统

基本信息

批准号：
09770345
负责人：
真嶋浩聡
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770345/
关键词：
膵分化 AR42J細胞 mRNA differential display

项目摘要

(1)野生株(2)デキサメサゾン処理(3)アクチビンA処理(4)アクチビンA+ベータセルリン処理したAR42J細胞から総RNAを抽出し、mRNA Differential Display法を用いて発現レベルの変化する遺伝子を同定し、その塩基配列を決定した。ノザンブロットを用いて発現レベルの変化を時間的、量的に詳細に検討し、その中で膵の分化に深く関与する遺伝子を(2)より11個、(3)より7個、(4)より20個同定した。情報伝達に関与する蛋白、膜蛋白、分泌蛋白、細胞骨格構成蛋白等の既知の遺伝子の他に未知の遺伝子も数多く得られた。膵の分化を調節する情報伝達系はほとんど解明されていないが、AR42J細胞のインスリン産生細胞への分化はMAPKKの阻害剤PD098059によって抑制された。すなわち膵内分泌細胞への分化にはMAP kinase cascadeの情報伝達系が重要であることが示唆された。そこで、AR42J細胞がインスリン産生細胞へ分化する過程で発現レベルが上昇する(4)より得られた20個の遺伝子の中でPD098059によって発現が抑制されるものは分化に深く関与していると考えられ、ノザンブロットで検討したところ13個の遺伝子の発現が抑制された。この中で未知の遺伝子は5個あり、その中でも特に変化の著しい3個の遺伝子をcDNAライブラリーよりクローニングした。2個はbrain-specific sodium phosphate cotransporter、tricarboxylate carrier proteinとホモロジーをもつ遺伝子であり、1個は全く未知の遺伝子であった。現在これらの遺伝子がコードする蛋白の機能解析を進めている。

（1）野生菌株（2）地塞米松治疗（3）激活素A治疗（4）激活素A处理（4）激活素A+β纤维素治疗基因被提取，并使用mRNA差异显示方法鉴定出具有不同表达水平的基因，并确定其碱基序列。在时间和定量上详细研究了表达水平的变化，并在（2），7 in（3）和20 in（4）中鉴定出了11种与胰腺分化深度分化的基因。除了已知的基因，例如参与信号传导的蛋白质，膜蛋白，分泌蛋白和细胞骨架成分蛋白外，还获得了许多未知基因。尽管调节胰腺分化的信号传导系统在很大程度上未知，但MAPKK PD098059的抑制剂抑制了AR42J细胞为产生胰岛素的细胞的分化。换句话说，有人建议MAP激酶级联信号系统对于分化为胰腺内分泌细胞很重要。因此，表达水平随着AR42J细胞分化为产生胰岛素的细胞（4）的20个基因（4），从分化为胰岛素产生细胞的过程中获得的20个基因，这些基因被PD098059抑制，被认为与差异化深度相关，当用13个基因的表达被抑制。其中，有五个未知基因，其中三个具有特别重大的变化，是从cDNA文库中克隆的。两个是具有同源性的基因：脑特异性磷酸钠共转运蛋白和三碳酸酯载体蛋白，一个是一个完全未知的基因。当前，正在进行对这些基因编码的蛋白质的功能分析。