赤血球系細胞のがん化に関わるetsファミリーPU.1/spi-1遺伝子の機能解析

ets家族PU.1/spi-1基因参与红系细胞癌变的功能分析

• 批准号: 09770837
• 负责人: 米山 ひとみ
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Sasaki Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770837/
• 关键词: PU.1; CBP

etsファミリー転写因子PU.1とコアクチベーターCBPの相互作用酵母を用いたTwo-hybrid法によりPU.1蛋白質と相互作用する蛋白質として単離されたCREB binding protein(CBP)との詳細な解析を行った。GST binding assayでin vitroでのPU.1とCBPの結合を確認し、種々の欠失変異体を用いてその結合部位も同定した。PU.1側の結合部位はN末側の転写活性化ドメイン(78-122a.a.)であり、CBP側の結合部位はZnフィンガーを含むC末側(1283-1915a.a.)であった。次に、PU.1の転写活性化能へのCBPの関与について機能解析を行った。ルシフェラーゼ遺伝子にPU.1結合部位を3回繰り返した配列を繋いだレポーター遺伝子をHeLa細胞に導入してreporter gene assayを行ったところ、PU.1による転写活性化はCBPにより協調的に働き、CBPの量依存性に増強された。一方、PU.1結合部位を欠いたCBPではPU.1と協調的に働くことはなかった。以上のことからCBPは転写因子PU.1と結合し、そのコアクチベーターとして機能することが明らかになった。今後、CBPを介した転写因子間の正または負のクロストークの詳細な解析を通じ、Etsファミリー転写因子が血液細胞の細胞増殖、分化、アポトーシスに及ぼす役割を明確にする。

Ets フ ァ ミ リ ー planning write factor PU 1 と コ ア ク チ ベ ー タ ー CBP の yeast を interaction with い た Two hybrid method に よ り PU と 1 protein interaction す る protein と し て 単 from さ れ た after CREB binding protein (CBP) と の detailed analytical line を っ な た. GST binding assayでin vitroで <s:1> PU.1とCBP <s:1> binding を to confirm <s:1>, species 々 <s:1> <s:1> less lost variant を using the <s:1> てそ binding site <e:1> to determine た. PU 1 side の combining site は N at the end of the side の planning write activeness ド メ イ ン (78-122 a. a.) で あ り, CBP side の combining site は zinc フ ィ ン ガ ー を む C at the end of the lateral (1283-1915 a. a.) で あ っ た. In the next に and PU.1 <s:1> 転, write the active chemical energy へ <s:1> CBP <e:1> relationship and the analysis of に に て て て functions を line った. ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 に PU 1 combining site を 3 back Qiao り return し た match column を 繋 い だ レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を HeLa に import し て reporter gene Assay を line っ た と こ ろ, PU 1 に よ る planning write activeness は CBP に よ り coordinated に 働 き, CBP の dependency に raised strong さ れ た. One party, PU. 1 combining site を owe い た CBP で は PU 1 と coordination に 働 く こ と は な か っ た. The above の こ と か ら CBP は planning write factor PU 1 と し, そ の コ ア ク チ ベ ー タ ー と し て function す る こ と が Ming ら か に な っ た. In the future, CBP を interface し た planning write factor between の is ま た は negative の ク ロ ス ト ー ク の detailed analytical を な じ, Ets フ ァ ミ リ ー planning write factor が blood cells の rights colonization, differentiation, ア ポ ト ー シ ス に and ぼ す "を clear cut に す る.

项目成果

Kihara et al.: "Down-regulation of c-Myc and Bcl-2 Gene Expression in PU.1-induced Apotosis in Murine Erythroleukemia Cells" International Journal of Cancer. (in press).

Kihara 等人：“PU.1 诱导的小鼠红白血病细胞凋亡中 c-Myc 和 Bcl-2 基因表达的下调”国际癌症杂志。

Yamada et al.: "Reduction of DNA Binding Activity of the GATA-1 Transcription Factor in the Apoptoic process Induced by Overexpression of PU.1 in Murine Erythroleukemia Cells" Experimental Cell Research. 245. 186-194 (1998)

Yamada 等人：“小鼠红白血病细胞中 PU.1 过度表达诱导的细胞凋亡过程中 GATA-1 转录因子的 DNA 结合活性降低”实验细胞研究。

Kihara et al.: "Down-regulation of c-Myc and B cl-2 Gene Expression in PU.1-induced Apoptosis in Murine Erythroleukemia Cells" International Journal of Cancer. 76. 523-530 (1998)

Kihara 等人：“PU.1 诱导的小鼠红白血病细胞凋亡中 c-Myc 和 B cl-2 基因表达的下调”国际癌症杂志。

Yamamoto et al.: "Physical and functional interactions between the transcription factor PU.1 and the coactivator CBP" Oncogene. 18. 1495-1501 (1999)

Yamamoto 等人：“转录因子 PU.1 和共激活因子 CBP 之间的物理和功能相互作用”癌基因。