ストレス蛋白質の腎疾患モデルおよび遺伝子導入による腎障害抑制に関する研究

点击翻译按钮获取中文摘要

熱ショック蛋白質(heat shock protein,HSPs)は,細胞防御・機能維持に必須であり,多くのHSPsは非ストレス下でも細胞内に発現し,分子シャペロンとしての機能を有する.我々は主要なHSPsを哺乳動物から精製し、特異抗体の作製に成功してきた.以前,gentamicin(GM)腎症で,近位尿細管の障害されたライソゾームにHSP73が蓄積することを報告した.平成9年度はこのモデルで非分子シャペロンであるarginosuccinate syntetase(ASS)との局在変化を比較検討した.また,poly-D glutamic acid(PDGA)によるライソゾーム蓄積症モデルでHSP73,HSP90,ASSの局在変化と量的変動を比較検討した.さらに培養細胞にHSP72遺伝子を導入し、各種有害な環境や毒物に対する抵抗性を検討し以下の結果を得た.1. GMをラットに投与し,HSP73とASSの局在変化を免疫電顕で観察し,HSP73が近位尿細管の障害されたライソゾームに特異的に蓄積することを確認した.2. PDGA腎症でも,GM腎症と同様にHSP73,HSP90は障害されたライソゾームに特異的に蓄積することを見い出した.したがって,HSPsは傷害されたライソゾーム内で能動的な役割を担っていると考えられる.3. HSP72の遺伝子をベクター(pBK-CMV)に導入し,リボソーム法によりブタ腎尿細管上皮細胞株(LLC-PK1)にトランスフェクションした.HSP72の過剰発現を抗HSP72抗体を用いた生化学的方法(immunoblot法)で確認し,HSP72過剰発現細胞株を作製した.この細胞株は過酸化水素およびシスプラチンによる障害に対して,コントロールより約2から3倍の抵抗性を示した.したがって,HSP72は尿細管細胞においても細胞防御・機能維持に必須と考えられる.