蛋白尿惹起分子p51のクローニング、並びにその分子機能の解明

蛋白尿诱导分子p51的克隆及其分子功能的阐明

• 批准号: 09770842
• 负责人: 河内 裕
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770842/
• 关键词: 糸球体; 上皮細胞; スリットダイアフラグム; 蛋白尿; p51; ZO-1

糸球体上皮細胞足突起間のslit diaphragm(SD)の構成蛋白p51を認識する単クローン抗体5-1-6により誘導される蛋白尿の発症機序の検討を続けてきた。昨年度までの検討で、p51の正確な局在、並びにSD部の構成蛋白であると報告されているもう一つの蛋白であるZO-1の局在との異同を明らかにした。また蛋白尿出現時のp51とZO-1の動態を検討した結果、蛋白尿がピークとなる抗体静注5日目では、p51のみならずZO-1もSD部から消失していることを免疫組織化学的手法、Western blot 法を用いて証明した。これらの蛋白が消失しているにも関わらず通常の電子顕微鏡を用いた検討では、足突起の融合などの形態学的変化を見い出すことはできず、SD構造の分子レベルでの微小な変化が係蹄壁のバリアー機能の破綻を招いたと考えられた。本年度(平成10年度)は、これらp51,ZO-1の局在変化のメカニズムを解析するため、単離糸球体を用いたin vitroの系を確立し、各種阻害剤に対する感受性試験を行った。検討の結果、5-1-6抗体がその対応抗原であるp51と結合すると、Ca^<++>依存性のcalmodulin-cytoske1etonの系を介したtubuline非依存性、actin依存性の機序によりp51,ZO-1がSD部から遊離し、その結果引き起こされるSDの機能低下により病的蛋白尿がもたらされたと考えられた。これらの観察結果は、98年度第31回米国腎臓学会総会において報告した((J Am Soc Nephrol 9,499,1998 abstract)。また胎生12日目に取り出した後腎原基を9日間培養するとin vitroにおいてもp51が発現することを確認した。現在このp51合成期の腎器官培養材料から作製したcDNA libraryを用いてp51分子のクローニングを継続中である。

A study of the mechanism of proteinuria induced by antibody 5-1-6 was conducted to identify the constitutive protein p51 in the slit diaphragm(SD) between the foot processes of spherical epithelial cells. In the past year, the correct position of p51 was discussed, and the structural protein of SD was reported. The results of dynamic analysis of proteinuria at p51 and ZO-1 levels were demonstrated by immunohistochemistry and Western blot. The protein disappeared in the middle of the day, and the morphological changes of the foot protrusions were observed in the middle of the day. The molecular changes of the SD structure were observed in the middle of the day, and the functional defects of the hoof wall were examined in the middle of the day. This year (2010), we conducted sensitivity tests for various kinds of resistance agents in order to analyze the situation of ZO-1 and P51. The 5-1-6 antibody was found to bind to p51 and Ca^++>-dependent calmodulin-cytosine 1 eton-mediated by tubuline-independent and actin-dependent mechanisms. The results of the survey were reported at the 31st Congress of the American Society of Nephrology in 1998 (J Am Soc Nephrol 9,499,1998 abstract). The embryo was born on the 12th day, and the kidney primordium was cultured on the 9th day. Now the kidney organ culture material of p51 synthesis stage is produced and used in the production of p51 molecule.

项目成果

Shimizu F: "The role of mesangial cell damage in progressive renal disease" Kidney and Blood Pressure Research. in press.

Shimizu F：“系膜细胞损伤在进行性肾病中的作用”肾脏和血压研究。

Nakayama M: "Roles of TGF - β and latent TGF - β - binding protein in glomerulosclerosis induced by two consecutive injections of monoclonal antibody 1 - 22 - 3 in rats" Nephron. 76. 82-89 (1997)

Nakayama M：“TGF-β和潜在TGF-β-结合蛋白在大鼠连续两次注射单克隆抗体1-22-3诱导的肾小球硬化中的作用”Nephron 76. 82-89 (1997)。

Nakamura T: "Blocking angiotensin II ameliorates proteinuria and glomerular lesions by reducing transforming growth factor-β in a rat model of progressive mesangioproliferative glomerulonephritis" Kidney Int. in press.

Nakamura T：“在进行性系膜增生性肾小球肾炎大鼠模型中，阻断血管紧张素 II 可通过减少转化生长因子-β 来改善蛋白尿和肾小球病变”Kidney Int。

Kawachi H: "Slit diaphragm - reactive nephritogenic MAb 5 - 1 - 6 alters expression of ZO - 1 in rat podocytes" Am J Physiol. 273. F984-F993 (1997)

Kawachi H：“裂隙隔膜 - 反应性肾炎 MAb 5 - 1 - 6 改变大鼠足细胞中 ZO - 1 的表达”Am J Physiol。

Fujigaki Y: "Altered anionic GBM components in monoclonal antibody against slit diaphragm-injected proteinuric rats." Kidney Int. 54. 1491-1500 (1998)

Fujigaki Y：“改变了针对裂隙隔膜注射蛋白尿大鼠的单克隆抗体中的阴离子 GBM 成分。”