神経因性疼痛モデルにおけるNGFのナトリウムチャネルへの影響

NGF 对神经病理性疼痛模型钠通道的影响

• 批准号: 09771175
• 负责人: 小佐井 和子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771175/
• 关键词: ホルマリンテスト; C-fos; 坐骨神経結紮; ラット

本来は神経因性疼痛モデルによりNa channelの影響を見る予定であったが、Na channelの免疫学的染色が困難であった。そのため、まずフォルマリンテストという炎症性侵害刺激におけるNa channelの関与をしらべた。その際、Na channel blockerにはフグ毒であるテトロドトキシン(TTX)を使用した。さらにその効果判定に脊髄後角のc-FOS免疫陽性細胞の発現数を調べた。方法:150〜280gのラットを用い、ペントバルビタール麻酔下で右坐骨神経を露出し、TTX(30μM)をガラスピペットで局所投与した。投与して10分後に同側の足底部にホルマリン150μlを皮下注した。ホルマリン注射2時間後、深麻酔下でパラホルムアルデヒドを用いて灌流固定し、脊髄をL2-S1まで切り出し、蔗糖溶液に一晩浸透した。50μmの連続凍結切片を作製し、c-FOSポリクロナール抗体を用いて免疫組織化学染色を施行した。L3-L5レベルの後角におけるFOS陽性細胞を顕微鏡下で観察し、dataは平均値±標準偏差で示し、統計はunpaired t-testで行った。[結果] ホルマリン注射により、脊髄後角I/II層でc-FOS陽性細胞が発現した。第4腰髄レベルでのc-FOS陽性細胞は、後角I/II(内側)23.8±13.6、(mean±SD)、I/II層(total)41.68±22.3、V/VI層 14.6±5.1が、TTX投与により後角I/II(内側)12.6±12.9、I/II層(total)27.1±17.1、V/VI層 10.2±5.6と有意に抑制された。[総括]TTXはホルマリンによるc-FOSの発現を抑制した。テトロドトキシンは急性炎症性の疼痛では痛みのマーカーであるc-FOS陽性細胞の発現をある程度抑制可能であり、炎症性の疼痛をある程度、抑えることができるかもしれない。

It is difficult to determine the effect of Na channel on neuropathic pain.そのため、まずフォルマリンテストという炎症性侵害刺激におけるNa channelの関与をしらべた。The channel blockers are used in conjunction with TTX. The number of c-FOS immunopositive cells in the posterior corner of the spine was adjusted by the method of determining the effect of the disease. Methods:150 ~ 280g of the right sciatic nerve was exposed to TTX(30μM) and the right sciatic nerve was exposed to TTX(30μM). After 10 minutes of shooting, the bottom of the foot on the same side of the shot was shot 150μl 2 hours after the injection, deep anesthesia was used for perfusion fixation, spinal cord L2-S1 was cut out, sucrose solution was soaked overnight 50μm frozen sections were prepared and c-FOS antibodies were used for immunohistochemical staining. L3-L5 cells were observed under microscope, data were measured with mean ± standard deviation, and statistics were unpaired. [Results] c-FOS positive cells were found in layer I/II of spinal dorsal horn after injection. c-FOS positive cells in the 4th lumbar region were 23.8±13.6 (mean±SD), 41.68±22.3 (total), 14.6±5.1 (total), 12.6±12.9 (mean±SD), 27.1±17.1 (total), 10.2±5.6 (total), respectively. [Summary]TTX Acute inflammatory pain may be inhibited by the presence of c-FOS positive cells.