歯周病原性細菌によって誘導されるマクロファージのアポトーシスに関する研究

牙周病原菌诱导巨噬细胞凋亡的研究

• 批准号: 09771834
• 负责人: 福永 真佐美
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771834/
• 关键词: Actinobacillus actinomycetemcomitans; U937; マクロファージ; アポトーシス; ネクローシス; 細胞障害性

歯周病原性細菌の一つであるActinobacillus actinomycetemcomitans(A.a.)は宿主の免疫防御システムを破壊することが知られているが、そのメカニズムについては依然不明な点が多い。従って、本研究では免疫担当細胞の一つであるマクロファージ(U937細胞)に対するA.a.の病原性をU937細胞に対するA.a.の細胞障害性とA.a.によるU937細胞の致死様式から検討した。平成9年度においては、U937細胞に対するA.a.の細胞障害性をトリパンブルー染色法によって、致死様式をアガロースゲル電気泳動によるDNAの断片化の検出により検索し、A.a.の細胞障害性は、U937細胞の分化に影響されること、致死様式は、U937細胞が分化するとアポトーシスからネクローシスに変化することを示したことから平成10年度においては、A.a.細胞障害性誘導物質の本体の追及に着手した。A.a.(Y4株)をB.H.I.培地を用い嫌気下で増殖させた後、10,000×gの遠心によって培養上清を回収した。回収された培養上清を硫酸アンモニウムによって濃縮し、ゲルろ過クロマトグラフィー(SephadexG-200,カラム10mm×90cm,流速1ml/8分/well)によって分画した。分取した画分について、それぞれPMAを培地に添加し72h培養後、接着能を誘導したU937細胞(PMA-U937細胞)に作用させた。PMA-U937細胞の致死活性はWST-1アッセイによって検討した。その結果分取した画分はかなり活性が喪失していたことからクロマトグラフィーの再検討が必要であるので現在再検討中である。

牙周致病细菌之一（A.A.）放线杆菌（A.A.）众所周知会破坏宿主的免疫防御系统，但其机制仍然鲜为人知。因此，在这项研究中，根据A.A对U937细胞的细胞毒性和A.A. A.A的细胞毒性，研究了A.a对巨噬细胞（U937细胞）的致病性（U937细胞），其中一种是免疫反应细胞。 1997年，A.A。的细胞毒性使用锥虫蓝色染色搜索到U937细胞，并通过通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA碎片来搜索致命模式，表明A.A.的细胞毒性受U937细胞的分化影响，并且从凋亡模式变为Necrosis时，在U937细胞中的杀伤力变化。 1998年，我们开始追求A.A.的主体。细胞毒性诱导剂。 A.A. （Y4菌株）使用B.H.I.在厌氧下生长。培养基和培养上清液是通过10,000×g离心收集的。将收集的培养上清液浓缩用硫酸铵浓缩，并通过凝胶过滤色谱法分离（Sephadexg-200，列，10 mM x 90 cm，流速1 ml/8 min/well）。对于每一部分，将PMA添加到培养基中并培养72小时，然后将混合物作用于诱导粘附能力的U937细胞（PMA-U937细胞）。通过WST-1分析检查了PMA-U937细胞的致命活性。结果，收集的分数有显着的活性损失，因此需要重新检查色谱法，目前正在重新检查。