有機カチオントランスポータのクローニングに基づく塩基性薬物の肝・腎排泄機構の解析

基于有机阳离子转运体克隆分析碱性药物肝肾排泄机制

• 批准号: 09771976
• 负责人: 奥田 真弘
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771976/
• 关键词: 腎尿細管; 分泌; 塩基性薬物; 有機カチオントランスポータ; 側底膜; アフリカツメガエル卵母細胞; 動物細胞安定発現系

本研究では、ラット有機カオントランスポータOCT1と機能特性について、卵母細胞発現系及び動物細胞安定発現系を用いて検討した。1. アフリカツメガエル卵母細胞発現系によるOCT1、OCT2の機能解析:OCT2を発現させた卵母細胞によるテトラエチルアンモニウム(TEA)取り込みは、膜ポテンシャルの影響を受けたが、pH勾配の影響は受けなかった。OCT2に対するTEAの見かけの親和性は、膜ポテンシャルによって上昇したが、最大輸送活性はほとんど影響を受けなかった。OCT1及びOCT2発現卵母細胞において、TEA及1l-メチル-4-フェニルピリジニウム(MPP)の輸送が促進されたが、両性イオンのレボフロキサシンは輸送されなかった。2. OCT1及びOCT2 cDNA導入MDCK細胞の確立並びに塩基性薬物輸送特性の解析:イヌ腎由来の培養上皮細胞MDCKに、OCT1またはOCT2 cDNAを挿入した発現ベクターを導入することにより、トランスポータの安定発現系(MDCK-OCT1及びMDCK-OCT2)を作成した。MDCK-OCT1及びMDCK-OCT2細胞によるTEA取り込みは、側底膜に薬物を添加した場合にのみ認められた。両トランスフェクタントによるTEA取り込みの濃度依存性を検討したところ、OCT1及びOCT2の基質親和性は類似していた。両トランスフェクタントのTEA取り込みに対する種々イオン性化合物の阻害効果を解析したところ、MPP、シメチジン、キニジン、ニコチン、N^1-メチルニコチンアミド、グアニジンによる阻害が認められたが、両性イオン化合物のセファレキシンによる阻害はほとんど認められなかった。各化合物の阻害定数はOCTl、OCT2間でほとんど差がなかったことから、OCT1及びOCT2は類似した基質認識特性を有する有機カチオントランスポータであると考えられた。

In this study, we investigated the application of OCT1 in functional characterization, oocyte development and animal cell stability development. 1. Function analysis of OCT1 and OCT2 in oocyte development system:OCT2 development in oocyte development system is affected by membrane concentration and pH matching. OCT2-TEA affinity, membrane affinity, maximum transport activity OCT1 and OCT2 detected oocyte trafficking, TEA, and 1-mer-4-mer-4-mer-mer-4-mer- 2. Establishment of OCT1 and OCT2 cDNA Introduction into MDCK Cells and Analysis of Basic Drug Delivery Characteristics: Establishment of Stable Development Systems (MDCK-OCT1 and MDCK-OCT2) for Detection of OCT1 and OCT2 cDNA in Cultured Epithelial Cells Derived from Kidney MDCK-OCT1 and MDCK-OCT2 cells were treated with TEA, and the lateral basal membrane was treated with TEA. The matrix affinities of OCT1 and OCT2 were similar to those of TEA. The analysis of the effect of TEA on the resistance of the compound is based on the following factors: MPP, MP The resistance of each compound is different between OCT1 and OCT2, and OCT1 and OCT2 are similar to each other.

项目成果

M.Okuda: "Molecular mechanisms of organic cation transport in OCT2-expressing xenopus cocytes" Biochim.Biophys.Acta. 1417・2. 224-231 (1999)

M.Okuda：“表达 OCT2 的爪蟾细胞中有机阳离子转运的分子机制”Biochim.Biophys.Acta 1417・2（1999）。

Y.Urakami: "Functional characteristics and membrane localization of rat multispecific organic cation transporters,OCT1 and OCT2,mediating tubular secretion of cationic drugs" J.Pharmacol.Exp.Ther.287・2. 800-805 (1998)

Y.Urakami：“大鼠多特异性有机阳离子转运蛋白OCT1和OCT2的功能特征和膜定位，介导阳离子药物的肾小管分泌”J.Pharmacol.Exp.Ther.287・2（1998）。

K.Inui: "Cellular and molecular mechanisms of reral tubular secretion of organic anions and cations." Clin.Exp.Nephrol.2・2. 100-108 (1998)

K.Inui：“肾小管分泌有机阴离子和阳离子的细胞和分子机制。”Clin.Exp.Nephrol.2·2（1998）。

Okuda,M.: "Characterization of organic ion transporters in volved in renal excretion of xenobiotics" Jpn.J.Physiol.47・S1. S58-S59 (1997)

Okuda, M.：“参与异生物质肾脏排泄的有机离子转运蛋白的表征”Jpn.J.Physiol.47·S1（1997）。

Y.Uwai: "Functional characterization of the rat multispecific organic anion transporter OAT1 mediating basolateral uptake of aninic drugs in the kidney" FEBS Lett.438・3. 321-324 (1998)

Y.Uwai：“大鼠多特异性有机阴离子转运蛋白 OAT1 介导肾脏中阴离子药物的基底外侧摄取的功能特征”FEBS Lett.438・3（1998）。