小腸,腎尿細管におけるジペプチド輸送担体のCDNAクローニングと機能解析

小肠和肾小管二肽转运载体的cDNA克隆及功能分析

• 批准号: 07857174
• 负责人: 奥田 真弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857174/
• 关键词: PEPT1; PEPT2; cDNAクローニング; ジペプチド; 輸送担体; 卵母細胞; 腸管吸収; 尿細管再吸収

小腸粘膜や腎尿細管上皮細胞における薬物の膜輸送過程は、薬物の吸収並びに排泄を支配する要因となる。小腸や腎皮質におけるジペプチド様薬物の輸送機構に関しては、これまで、膜小胞系や培養細胞系を用いた解析が行われた結果、複数の輸送系が関与していることが示唆された。本研究では、ウサギ小腸ジペプチド輸送担体(rbPEPT1)のアミノ酸配列情報を基に、ラット由来のジペプチド輸送担体のcDNAをクローニングし、その実体並びに輸送特性について検討を加えた。1.rbPEPT1との相同性を示したDNA断片を用い、ラット腎cDNAライブラリーをスクリーニングしたところ、710個のアミノ酸をコードする全長約2.9kbのcDNA(rPEPT1)を得た。rPEPT1のアミノ酸配列はrbPEPT1と77%の相同性を示し、ハイドロパシー解析から12本の膜貫通領域を持つものと推定された。rPEPT1とmRNAの発現は小腸に多く、腎皮質部においても認められたが他の臓器では検出されなかった。合成rPEPT1 cRNAを注入した卵母細胞において、両性イオン型のcephradine、アニオン型のceftibutenの取り込みがいずれもH^+勾配に依存して上昇したことから、rPEPT1は荷電状態の異なるペプチド様薬物を輸送することが明らかとなった。2.1.と同様の方法を用い、729個のアミノ酸をコードするcDNA(rPEPT2)を得た。rPEPT2のアミノ酸配列はrPEPT1と48%の相同性を示した。rPEPT2 mRNAの発現は、腎、脳、肺、脾臓で認められたが、小腸では検出されなかった。さらに、合成rPEPT2 cRNAを注入した卵母細胞において、抗癌剤bestatinの取り込みがH^+勾配依存的に促進された。ラット臓器には少なくとも2種類のジペプチド輸送担体が発現し、ペプチド様薬物の吸収に関与することが明らかとなった。

The membrane transport process of small intestinal mucosa and renal tubule epithelial cells is the main factor controlling the absorption and excretion of drugs. The results of analysis of cultured cell lines of small intestine and kidney cortex showed that the transport mechanism of small intestine and kidney cortex was related to the analysis of small intestine and membrane cell lines. In this study, we investigated the base, origin, and transport properties of rbPEPT1, which is a small intestine transport vector. 1. The identity of rbPEPT1 was demonstrated by DNA fragment analysis and cDNA sequencing. 710 cDNA fragments (rPEPT1) were identified. The cDNA fragment was approximately 2.9 kb in length. rPEPT1 has a 77% identity with the corresponding acid sequence, and the analysis results show that there are 12 native membrane penetration domains. rPEPT1 mRNA is expressed in the small intestine and in the renal cortex. Synthetic rPEPT1 cRNA is injected into oocytes, and the oocyte is divided into two types: the first type is cephalradine, the second type is ceftibuten, and the third type is ceftibuten. The first type is H +-dependent. The second type is rPEPT1-dependent. The third type is rPEPT1-dependent. 2.1. Using the same method, 729 cDNA fragments (rPEPT2) were obtained. rPEPT2 has a 48% identity to rPEPT1. The expression of rPEPT2 mRNA was detected in the kidney, lung, spleen and small intestine. In addition, the synthesis of rPEPT2 cRNA into oocytes is promoted by the selection of anti-cancer agents and H^+-dependent combinations. There are two types of transport carriers in the device, one for each type of transport carrier, and the other for each type of transport carrier.

项目成果

H. Saito: "Cloning and characterization of a rat H^+/peptide cotransporter mediating absorption of β-lactam antibiotics in the intestine and kidney." J. Pharmacol. Exp. Ther.275. 1631-1637 (1995)

H. Saito：“介导肠道和肾脏中 β-内酰胺抗生素吸收的大鼠 H^+/肽协同转运蛋白的克隆和表征。”J. Pharmacol.275（1995）。

H. Saito: "Molecular cloning and tissue distribution of rat peptide transporter PEPT2." Biochim. Biophys. Acta. (in press). (1996)

H. Saito：“大鼠肽转运蛋白 PEPT2 的分子克隆和组织分布。”