組換えDNA技術を利用したリンゴ果肉の褐変の解明と抑制

利用重组 DNA 技术阐明和抑制苹果果肉褐变

基本信息

批准号：
09780004
负责人：
春田美好
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780004/
关键词：
apple enzymatic browning polyphenol oxidase

项目摘要

リンゴの褐変現象はポリフェノール類がポリフェノールオキシダーゼ(PPO)により酸化されることによると考えられている。本研究ではリンゴにおける褐変現象の詳細を解明・抑制する目的で遺伝子組換え技術を用いて以下のような実験を行った。リンゴPPOの遺伝子をtacプロモーターの下流につないだベクターを大腸菌に導入しIPTGによりPPOを誘導発現した。発現させたタンパク質は電気泳動で分離し、ゲルから精製し、さらにマウスを用いて本タンパク質に対する抗体を作製した。作製した抗体を用いたウエスタンブロッティングにより、リンゴ及びナシ、ラフランス、モモ、カリン、ビワのリンゴと同じバラ科に属する果実類のPPOとの相同生を調べたところ、いずれも65kDaと59.3kDaのバンドが確認され、これら果実類には性質の似たPPOが存在することが明らかとなった。さらに、リンゴのPPO遺伝子の配列に基づいて作製したプライマーを用いてナシ、ラフランス、モモ、カリン、ビワのPPO遺伝子の一部分をPCR法でクローニングした。DNA塩基配列を決定し比較したところ、これら果実類のPPOはこれまで報告されている植物のものの中でも特にバラ科間でのホモロジーが高いことが示唆された。

苹果的褐变现象被认为是由多酚氧化酶（PPO）氧化引起的。在这项研究中，使用转基因技术进行以下实验，以澄清和抑制苹果中褐变的细节。将TAC启动子下游连接到Apple PPO基因的载体被引入大肠杆菌，并由IPTG诱导PPO。通过电泳分离表达的蛋白质，从凝胶中纯化，此外，使用小鼠制备针对蛋白质的抗体。使用生产抗体的蛋白质印迹调查了苹果和梨，梨，桃子，小腿，小腿和lo的同源生命，其中PPO的水果中的PPO属于同一玫瑰花家族，并且在所有情况下都证实了与这些植物相似的PPOS在所有情况下都证实了PPOS中的PPO，并证实了这些木材中的PPO。此外，使用基于苹果PPO基因的序列生成的引物，将PER，LA FRANGH，PEACH，CALF，CALF和LOQUAT的PPO基因的部分通过PCR克隆。确定并比较了DNA测序，并提出这些水果的PPO在酒渣鼻科家族中特别高。