ヒトD群不死化抑制遺伝子のマッピングとポジショナルクローニング

人类D组永生化抑制基因的定位和定位克隆

• 批准号: 10771296
• 负责人: 鈴木 敏和
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771296/
• 关键词: 不死化抑制遺伝子; マッピング; DT40

昨年度は苦労の末、正常に増殖するヒト7番染色体を含むDT40由来雑種細胞(DT40ー7R)の取得に成功した。微小核細胞融合法により、この細胞のヒト7番染色体をD群不死化細胞株Met5Aへ導入したところ、分裂停止を誘導したことから、雑種細胞はD群不死化抑制遺伝子を安定に保持していることが確認された。そこで今年度は、PCR法によりヒトDNAをクローン化し、テロメア配列を含む改変ベクターへ挿入後、DT40細胞へトランスフェクションを行い、特定領域のみを欠失したヒト7番染色体の構築を試みた。現在までに、ひとつの短腕領域(7p11-13)および2つの長腕領域(7q21-22、7q31)のDNAを含む3種の改変ベクターを構築し、DT40細胞へトランスフェクションを行っている。安定形質導入クローンの中で、遺伝子相同組換えを起こしたと思われるクローンが幾つか得られている。しかし、いずれもテロメア配列が染色体の中に組み込まれており、特定領域を欠失したヒト7番染色体を含むクローンはまだ得られていない。今後、現状よりもトランスフェクションの規模を大きくし、目的クローンの取得を目指す。平行して、リバータント解析によるマッピングも試みた。7番染色体の導入により分裂停止したMet5A細胞より、増殖を再開した24クローンを分離した。これらクローンよりゲノムDNAを調製し、STSマーカーを用いた多系解析を行っている。増殖再開クローンで共通して欠失している領域の限定を目指しているが、多数のマーカーの解析が必要なため、結論を出すのにもう少し時間を要す。

In the past year, we have successfully obtained the seed cells (DT40 - 7R) from the end of the normal propagation. Micro-nuclear fusion method, the cells of 7 chromosomes, D group immortalized cell line Met5A, induced by mitosis, the cells of 7 chromosomes, stable and stable. This year, the PCR method is used to analyze DNA sequence, gene sequence, DNA sequence, Now, the DNA of the short arm region (7p11 -13) and the long arm region (7q21 -22, 7q31) contains three kinds of DNA modifications. DT40 cells are used to construct the DNA. The stability of the form is introduced into the medium, and the inheritance is the same. In addition, the number of chromosomes in the middle of the chromosome group is reduced to 7 in the specific domain. In the future, the scale of the current situation and the acquisition of the current situation will be expanded. Parallel to the game, the game is played. 7. Chromosome introduction, division, and termination of Met5A cell cycle, propagation, and re-opening of 24 chromosomes This is the first time that we've had a problem with DNA modulation, STS, and multi-system analysis. The definition of the common domain, the analysis of the majority of the domain, the analysis of the majority of the domain, the analysis of the domain, and the analysis of the domain are all important.