アポトーシス制御因子Bakの機能解析とそれに基づく薬剤開発への応用

凋亡调节因子Bak的功能分析及其在药物开发中的应用

基本信息

批准号：
10771309
负责人：
江口英孝
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771309/
关键词：
アポトーシス Bak 乳癌エストロゲンレセプター Bc1-2

项目摘要

乳癌手術材料より得られた27検体より、全RNAを抽出し、RT-PCR法により、アポトーシス制御因子Bcl-2、Bcl-xL、Bak、Bax、エストロゲンレセプター(ER)、さらにERの標的遺伝子であるpS2の発現を測定し、EIA法で定量したER蛋白質の発現との相関について検討した。ER陰性の乳癌では陽性のものに比してアポトーシス抑制因子Bc1-2およびアポトーシス誘導因子であるBakの発現量の低下が認められた。一方、パラフィン包埋した乳癌手術材料107検体を用いた免疫染色により、Bak蛋白質の発現量もERの発現と強く相関し、RNAで得られた結果と一致していた。このようにERの陰性化にともなうアポトーシス誘導因子Bakの発現量の変動が乳癌細胞の増殖に影響を与えるかについて、センスまたはアンチセンスのBak mRNAを恒常的に発現する乳癌細胞株MCF-7の安定形質転換株を作成し、種々のエストロゲン(E2)濃度下で足場非依存性細胞増殖能を検討したところ、Bak蛋白質を高発現する細胞は高濃度のE2存在下でコントロールに比して、コロニー形成能が低下し、アンチセンスを導入した株は低濃度のE2存在下で、コントロールより高いコロニー形成能を示した。よってアポトーシス誘導因子Bakは乳癌の悪性化、特にE2非依存性増殖能の獲得において重要な役割を担っていることが示唆された。Bakの発現ベクターを微量注入法でMCF-7細胞に導入し、一過的に発現させたところ、Bakと同様にアポトーシスを誘導した。Bakは癌抑制遺伝子p53の標的遺伝子であり、乳癌の多くの癌でp53遺伝子に変異・欠失が認められ、Bakを介する系での薬剤によるアポトーシス誘導に抵抗性を示すようになる。BakはBakと同様にアポトーシスを誘導したところから治療の新たな標的遺伝子として有効であると考えられる。

从从乳腺癌手术材料中获得的27个标本中提取总RNA，并表达凋亡调节剂BCl-2，Bcl-XL，BAK，BAK，BAX，雌激素受体（ER）和PS2，ER的靶基因通过RT-PCR测量，通过RT-PCR测量与EIA量化的ER蛋白质的相关性。在ER阴性乳腺癌中，与阳性相比，凋亡抑制剂BC1-2和凋亡诱导剂BAK的表达水平降低了。另一方面，使用107个石蜡膜的乳腺癌手术材料样品进行免疫染色表明，BAK蛋白的表达水平与ER的表达密切相关，并且与RNA获得的结果一致。通过这种方式，我们创建了乳腺癌细胞系MCF-7的稳定转化剂，该转化剂构成表达感官或反义mRNA，以确定凋亡诱导因子的表达水平是否会影响与乳腺癌细胞的增殖相关，并在各种雌激素（E2）下（E2）浓度在锚固癌细胞的增殖和检查中是否会影响锚固不依赖于锚固的细胞扩散能力。与在高E2浓度的存在下相比，表达高BAK蛋白的细胞具有较低的集落形成能力，而引入反义的菌株在存在低E2浓度的情况下表现出比对照更高的菌落形成能力。因此，有人提出诱导凋亡因子BAK在乳腺癌的恶性转化中起着重要作用，尤其是在获得E2非依赖性增殖潜力方面。通过微注射将BAK的表达向量引入MCF-7细胞中，并瞬时表达，并以与BAK相同的方式诱导凋亡。 BAK是癌症抑制基因p53的靶基因，在许多乳腺癌癌症中已经观察到了p53基因中的突变和缺失，使其具有药物介导的药物诱导凋亡。像巴克一样，巴克（Bak）诱导凋亡，被认为是作为治疗的新靶基因有效的。