アポトーシス制御因子Bakの機能解析とそれに基づく薬剤開発への応用

凋亡调节因子Bak的功能分析及其在药物开发中的应用

• 批准号: 10771309
• 负责人: 江口 英孝
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771309/
• 关键词: アポトーシス; Bak; 乳癌; エストロゲンレセプター; Bc1-2

乳癌手術材料より得られた27検体より、全RNAを抽出し、RT-PCR法により、アポトーシス制御因子Bcl-2、Bcl-xL、Bak、Bax、エストロゲンレセプター(ER)、さらにERの標的遺伝子であるpS2の発現を測定し、EIA法で定量したER蛋白質の発現との相関について検討した。ER陰性の乳癌では陽性のものに比してアポトーシス抑制因子Bc1-2およびアポトーシス誘導因子であるBakの発現量の低下が認められた。一方、パラフィン包埋した乳癌手術材料107検体を用いた免疫染色により、Bak蛋白質の発現量もERの発現と強く相関し、RNAで得られた結果と一致していた。このようにERの陰性化にともなうアポトーシス誘導因子Bakの発現量の変動が乳癌細胞の増殖に影響を与えるかについて、センスまたはアンチセンスのBak mRNAを恒常的に発現する乳癌細胞株MCF-7の安定形質転換株を作成し、種々のエストロゲン(E2)濃度下で足場非依存性細胞増殖能を検討したところ、Bak蛋白質を高発現する細胞は高濃度のE2存在下でコントロールに比して、コロニー形成能が低下し、アンチセンスを導入した株は低濃度のE2存在下で、コントロールより高いコロニー形成能を示した。よってアポトーシス誘導因子Bakは乳癌の悪性化、特にE2非依存性増殖能の獲得において重要な役割を担っていることが示唆された。Bakの発現ベクターを微量注入法でMCF-7細胞に導入し、一過的に発現させたところ、Bakと同様にアポトーシスを誘導した。Bakは癌抑制遺伝子p53の標的遺伝子であり、乳癌の多くの癌でp53遺伝子に変異・欠失が認められ、Bakを介する系での薬剤によるアポトーシス誘導に抵抗性を示すようになる。BakはBakと同様にアポトーシスを誘導したところから治療の新たな標的遺伝子として有効であると考えられる。

Breast cancer surgery material よ り have ら れ た 27 検 body よ り を, total RNA extraction し, rt-pcr method に よ り, ア ポ ト ー シ ス suppression factor the Bcl - 2, the Bcl - xL, Bak, Bax, エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー (ER), さ ら に ER の mark heritage 伝 son で あ る pS2 の 発 now を で quantitative determination し, EIA method し た The occurrence of ER protein と と is related to に, た, て検 and <s:1> た. ER negative の breast で は positive の も の に than し て ア ポ ト ー シ ス inhibitory factor Bc1-2 お よ び ア ポ ト ー シ ス factor で あ る Bak の 発 low quantity の が now recognize め ら れ た. Side, パ ラ フ ィ ン embedding し た breast surgery material 107 を 検 body with い た immune dyeing に よ り, Bak protein の 発 now quantity も ER の 発 now strong と く phase masato し, RNA で ら れ た と consistent し て い た. こ の よ う に ER の feminization に と も な う ア ポ ト ー シ ス factor Bak の 発 amount is の - move が に influence を の raised colonization and breast cancer cells え る か に つ い て, セ ン ス ま た は ア ン チ セ ン ス の Bak MRNA を constant に 発 now す る breast cancer cell line MCF - 7 の stable form quality planning in plant を し consummate, kind of 々 の エ ス ト ロ ゲ ン (E2) concentrations で not enough field dependence cells raised colonization を beg し 検 た と こ ろ, Bak protein high を 発 now す は る cells in the presence of high concentration の E2 で コ ン ト ロ ー ル に than し て, コ ロ ニ can lower が し ー formation , ア ン チ セ ン ス を import し た strains は で, in the presence of low concentration の E2 コ ン ト ロ ー ル よ り high い コ ロ ニ ー formation can を し た. よ っ て ア ポ ト ー シ ス factor Bak は breast の 悪 sex, especially に E2 of dependency raised colonization can get に の お い cut を bear っ て important な service て い る こ と が in stopping さ れ た. Bak の 発 now ベ ク タ ー を trace injection method で MCF - 7 cell に import し, after に 発 now さ せ た と こ ろ, Bak と with others に ア ポ ト ー シ ス を induced し た. Bak は cancer inhibition of heritage 伝 son p53 の mark heritage 伝 son で あ り, breast cancer more than の く で の carcinoma p53 heritage 伝 son に - vision loss, owe が recognize め ら れ, Bak を interface す る department で の 薬 tonic に よ る ア ポ ト ー シ ス induced に resistance を shown す よ う に な る. Bak は Bak と with others に ア ポ ト ー シ ス を induced し た と こ ろ か ら treatment の new た な mark heritage 伝 son と し て have sharper で あ る と exam え ら れ る.

项目成果

Eguchi H.: "Different expression patterns of Bc1-2 family genes in breast cancer by estrogen status with special reference to pro-apoptotic Bak gene"Cell Death & Differentiation. (印刷中). (2000)

Eguchi H.：“乳腺癌中 Bc1-2 家族基因的不同表达模式，特别是促凋亡 Bak 基因”（正在出版）。

Hidetaka Eguchi et al.: "The role of apoptosis in breast carcinogenesis with special reference to pro-apoptotic Bak gene" Proceedings of U.S.-Japan Workshop on Molecular Carcinogenesis and Molecular Epidemiology of Cancer. 17-18 (1998)

Hidetaka Eguchi 等人：“细胞凋亡在乳腺癌发生中的作用，特别是促细胞凋亡 Bak 基因”美国-日本分子癌发生和癌症分子流行病学研讨会论文集。