長鎖糖鎖を基質とする硫酸基転移酵素の検索と精製及びその性状解析

使用长链糖链作为底物的磺基转移酶的搜索、纯化和表征

基本信息

批准号：
10771298
负责人：
宮本大誠
金额：
$ 1.22万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、3糖以上の長糖鎖の硫酸化修飾を触媒する新規の硫酸基転移酵素の検索と精製法の確立、およびその性状解析を目的としている。本年度はSM2b、SB2、或いはSM1aなど3糖以上の糖鎖を有する糖脂質糖鎖に硫酸基転移を触媒する酵素(Gg_3Cer sulfotransferase)の精製および性状解析、加えて昨年度に続きスルファチド(SM4)合成に関わるラット腎由来硫酸基転移酵素(GalCer sulfotransferase:CST)の精製、構造決定および性状をさらに詳細に解析した。ラット腎臓にはSM2bなど末端GalNAcが硫酸化された糖脂質が他の臓器に比べ豊富に存在する。先の酵素の精製法を検討し、さらにその部分精製標品を用いて酵素学的性状や基質特異性を確認した。この結果、本酵素が糖脂質糖鎖末端GalNAc(アセチルガラクトサミン)3位を硫酸化し、主にGg_3CerからSM2b、あるいはSM2aからSB2の生合成に関与する酵素であることを見い出した[Characterizaition of Gg_3Cer sulfotransferase from rat kidney.投稿準備中。第72回日本生化学会大会発表など]。また、CSTは末端Gal(ガラクトース)3位の硫酸基転移酵素であるが、Gg_3Cerの末端GalNAc3位はほとんど硫酸化しないこと、一方、本酵素はCSTの至適アッセイ条件では糖脂質糖鎖に硫酸基転移活性を示さないことを確認した。すなわち、本研究結果は本酵素がCSTとは明らかに酵素学的に異なる糖脂質糖鎖硫酸基転移酵素であることを示していた。なお、私は最近CSTラットおよびマウスのCSTのcDNA配列を一部決定している。今後この点を基盤としスルファチド合成や硫酸基転移酵素とその生物学的機能に関し遺伝子工学的アプローチからも解析をすすめる予定である。

这项研究旨在寻找新型的硫酸盐转移酶，以催化三糖的长糖链的硫酸化修饰，建立纯化方法并分析其特性。今年，我们分析了用三糖或更多糖链（例如SM2B，SB2，SB2或SM1A）催化硫酸盐转移到糖脂链中的酶（GG_3CER磺基转移酶）的纯化和表征，并在去年进行了分析，我们分析了纯化的固定仪和特征。磺胺转移酶：CST）更详细地参与磺胺（SM4）合成。与其他器官相比，大鼠肾脏中的大鼠肾脏丰富，例如SM2B，例如SM2B。研究了先前的酶纯化方法，并使用部分纯化的制剂确认酶特性和底物特异性。结果，我们发现该酶在糖脂糖 - 糖末端GalNAC（乙酰基乳糖胺）的第三位硫化，主要与GG_3Cer的SB2生物合成相关[GG_3Cer Sulfotransferase from gatney.ppost in regeNation.ppost sb2 [texizaitizaity from gg_3cer sulfotransferase.ppost in prokention.ppost。 [在日本生物化学社会第72届会议上的报道等]此外，尽管CST是终端GAL（半乳糖）3位置的硫酸盐转移酶，但已证实GG_3Cer的末端GALNAC 3位置几乎没有硫酸化，而这种酶在糖果中的糖含量不足，但该酶在糖果中表现不佳。换句话说，这项研究的结果表明，该酶是一种糖脂糖硫酸盐转移酶，与CST显然不同。此外，我最近已经部分决定了CST大鼠和小鼠的cDNA序列。基于这一点，我们还将促进对硫化物合成，硫酸盐转移酶及其基因工程方法的生物学功能的分析。