インフルエンザA型ウイルスの宿主細胞膜由来糖タンパク質受容体の同定と機能解析

甲型流感病毒宿主细胞膜源性糖蛋白受体的鉴定及功能分析

• 批准号: 18590065
• 负责人: 宮本 大誠
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18590065/
• 关键词: インフルエンザA型ウイルス; 糖タンパク質; 宿主細胞膜; シアリダーゼ; N結合型糖鎖

ヒト肺上皮細胞株A549の細胞膜由来糖タンパク質でインフルエンザA型ウイルスの受容体として機能しうるシアル酸含有糖タンパク質を検索した。なお、目的とする糖タンパク質の解析にあたり、宿主細胞膜抽出法やウイルス結合検出法を検討した。結論として、細胞膜抽出は細胞膜/オルガネラ膜抽出キット(S-PEK)を用い、TLC/immnunostaining法の変法でインフルエンザウイルスの結合性を検出している。この方法により、ウイルスノイラミニダーゼ(NA)活性をザナビルで抑制することで、抽出した細胞膜画分において4つの分子量領域(85kDa、 20kDa、 170kDa、 200kDa 以上)にウイルス粒子と特異的な結合を示す糖タンパク質が存在することを明らかとした。さらに、2DZOOMシステムで詳細に解析したところ、同様の分子量領域には複数(少なくとも2-5スポット)のウイルス粒子と特異的な結合する糖タンパク質が存在することを確認した。これらの領域の糖タンパク質とウイルスとの結合はザナビル非存在下、あるいはシアル酸糖鎖分解酵素(α2-3,6,8,9シアリダーゼなど)処理サンプルにより消失した。同様に、標識レクチン(MAA、SNA)染色法でも糖消化酵素処理により、ウイルス結合性を示すすべての分子量領域のバンドが消失したことから、4つの分子量領域のウイルス結合性糖タンパク質はシアル酸含有糖タンパク質であることを示している。このうち、少なくとも85kDa、 120kDaの2つの領域の糖タンパク質はN-グリカナーゼF処理で消化されることから、この領域のウイルス結合糖タンパク質はN結合型糖鎖が関与することを明らかとした。以上を総括すると、85kDa領域、120kDa領域に存在した少なくとも6つのスポット領域(糖タンパク質)をウイルス結合性糖タンパク質候補として着目し、現在これらの糖タンパク質の同定を進めている。

The cell membrane of lung epithelial cell line A549 is derived from sugar and its receptor function is characterized by its sugar content. For the analysis of sugar molecules, the host cell membrane extraction method and the cell combination detection method were discussed. Conclusion: Cell membrane extraction and membrane extraction (S-PEK) can be used in the study. TLC/immnunostaining method can be used to detect the binding property of cell membrane. This method is aimed at the inhibition of the activity of N-A (NA), the extraction of N-A (NA) from cell membranes, and the specific binding of N-A particles in 4 molecular weight domains (85kDa, 20kDa, 170kDa, 200kDa or more). In addition, 2DZOOM system is analyzed in detail, and it is confirmed that there are multiple (less than 2-5) particles and specific binding substances in the same molecular weight domain. In the absence of the enzyme (α2 - 3, 6, 8, 9), the enzyme (α2- 3, 6, 8, 9) is used to process the enzyme. Similarly, the MAA and SNA staining methods show that sugar digestive enzymes are treated with sugar and its binding properties in the molecular weight domain. The sugar chain in the domain of 85kDa, 120kDa and 2 kD is N-linked and the sugar chain in the domain of 85 kDa, 120 kDa and 2 kD is N-linked. These include the 85kDa domain, the 120kDa domain, and the presence of a small number of sugar molecules in the domain (sugar molecules).

项目成果

Identification and characterization of carbohydrate molecules in mammalian cells recognized by dengue virus type 2

• DOI: 10.1093/jb/mvj067
• 发表时间: 2006-03-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Aoki, C;Hidari, KIPJ;Suzuki, Y
• 通讯作者: Suzuki, Y

Human trachea primary epithelial cells express both sialyl-2,3 Gal receptor for human parainfluenza virus type 1 and avian influenza viruses, and sialyl-2,3 Gal receptor for human influenza viruses.

人气管原代上皮细胞表达人副流感病毒1型和禽流感病毒的唾液酸-2,3Gal受体，以及人流感病毒的唾液酸-2,3Gal受体。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Glycoconj. J. 23
• 作者: Toshihiro Kogure;Takashi Suzuki;Tadanobu Takahashi;Daisei Miyamoto;Kazuya I. P. J. Hidari;Guo Chao-Tan;Toshihiro Itoh;Yoshihiro Kawaoka;Yasuo Suzuki
• 通讯作者: Yasuo Suzuki

Edible bird's nest extract inhibits influenza virus infection.

• DOI: 10.1016/j.antiviral.2006.02.005
• 发表时间: 2006-07
• 期刊: Antiviral research
• 影响因子: 7.6
• 作者: Guo CT;Takahashi T;Bukawa W;Takahashi N;Yagi H;Kato K;Hidari KI;Miyamoto D;Suzuki T;Suzuki Y
• 通讯作者: Suzuki Y

Sulfatide and its synthetic analogues recognition by Moraxella catarrhalis

• DOI: 10.1111/j.1348-0421.2006.tb03873.x
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Ozcelik, Pinar;Bezirci, Fatma Betul;Ahmed, Kamruddin
• 通讯作者: Ahmed, Kamruddin