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新規β-1,4-ガラクトース転移酵素の機能の解析とその糖鎖生物学への応用

新型β-1,4-半乳糖基转移酶的功能分析及其在糖生物学中的应用

基本信息

批准号：
10771312
负责人：
佐藤武史
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実施計画に基づいて研究を行い、細胞の癌化と新規β-1,4-ガラクトース転移酵素(β-1,4-GalT II)遺伝子の発現動態との関係について以下の新しい知見が得られた。1,MTAgはマウス線維芽細胞(NIH3T3)の形質転換細胞であり、NIH3T3に比べ高分岐糖鎖の発現が2倍高く、ヌードマウス皮下に移植すると速やかに腫瘍を形成し肺への転移能も高い。両細胞のβ-1,4-GalT活性を測定した結果、MTAgでNIH3T3に比べて1.2倍高い活性が検出された。次に、両細胞におけるβ-1,4-GalT II遺伝子と既知のβ-1,4-GalT遺伝子の発現を調べた。その結果、既知のβ-1,4-GalT mRNAの発現は両細胞間で同じだったが、β-1,4-GalT II mRNAの発現はMTAgで2.4倍増大していた。本研究を行っている間に、新たにβ-1,4-GalT遺伝子が幾つかクローニングされたので、これらについても調べたが、細胞の癌化に伴う増大は認められなかった。2,ヒト大腸癌由来SW480にβ-1,4-GalT IIのアンチセンスDNAを導入することで、細胞表面糖鎖パターンを変え、癌細胞の形質を変化させることができるかどうかを検討した。細胞膜糖タンパク質をレクチンを用いて解析した結果、アンチセンス導入細胞で2,6分岐側鎖やポリ-N-アセチルラクトサミン構造の発現が減少していた。以上の結果から、β-1,4-GalT II遺伝子は細胞の癌化に伴って増大し、この遺伝子の発現を制御することで、癌細胞の転移に関与する2,6分岐側鎖やポリ-N-アセチルラクトサミン構造の発現を抑制することができることが判明した。さらに、この遺伝子導入細胞の細胞増殖速度や細胞接着性について検討したが、対照細胞と比べて有意な差は見られなかった。今後は、in vivoで造腫瘍能や転移能を検討する予定である。

This year's research implementation plan includes basic research, cell carcinogenesis and new regulations. The development dynamics and relationship of β-1,4-GalT II gene have been studied. 1,MTAg cells in vitro (NIH 3T3) were found to be able to differentiate glycogen chain 2 times more rapidly than NIH 3T3 cells, and the rate of tumor formation in subcutaneous transplantation was significantly higher than NIH 3T3 cells. The β-1,4-GalT activity of MTAg was 1.2 times higher than that of NIH 3T3.β-1,4-GalT II gene and the development of known β-1,4-GalT gene are regulated in the secondary and secondary cells. The results showed that the expression of β-1,4-GalT mRNA increased by 2.4-fold compared with that of β-1,4-GalT II mRNA. In this study, we developed a new β-1,4-GalT gene, which was used to detect the growth of cell cancer. 2. The origin of colorectal cancer SW480 β-1,4-GalT II gene DNA introduction, cell surface sugar chain change, cancer cell quality change, and so on. As a result of the analysis of cell membrane sugar content, the occurrence of 2, 6-branched side locks and N-linked structure was reduced when introduced into cells. These results indicate that β-1,4-GalT II gene is associated with increased carcinogenesis, inhibition of gene development, and migration of cancer cells. In addition, the cell proliferation rate of the introduced cells and the cell adhesion were investigated. In the future, in vivo, the selection process can be carried out.