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癌細胞における新奇β-1,4-ガラクトース転移酵素V遺伝子の発現調節機構の解明

阐明新型β-1,4-半乳糖基转移酶V基因在癌细胞中的表达调控机制

基本信息

批准号：
12771428
负责人：
佐藤武史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実施計画に基づいて研究を行い、以下の新しい知見が得られた。1)昨年度に単離したゲノムDNAからβ-1,4-GalT V遺伝子の5'上流域(2.2kb)を調製し、これをホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流に繋いでプラスミドを作製した。このプラスミドを種々のヒト癌細胞(A549,SW480,'K562,Molt-4)に導入,発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定することでβ-1,4-GalT V遺伝子5'上流域のプロモーター活性を評価した。その結果、β-1,4-GalT Vプロモーターを含むプラスミドを細胞に導入すると、対照に比べて6-200倍高い活性が見られたので、単離したDNA断片がプロモーター活性を担っていると考えられた。さらに、β-1,4-GalT Vプロモーターから転写因子AP-1,c-Myb, Etsファミリーが結合する部位を除くと、SW480においてプロモーター活性の低下が見られた。2)β-1,4-GalT Vプロモーターには、srcチロシンキナーゼによって活性化される転写因子と結合する領域が存在することから、srcチロシンキナーゼの阻害剤であるherbimycin Aを用いて、ヒト肺癌細胞A549におけるβ-1,4-GalT V遺伝子の発現動態及び糖鎖構造の変化の有無を解析した。薬剤で処理した細胞では、未処理の細胞に比べて抗リン酸化チロシン抗体PY-20と反応するタンパク質の数が減少し、β-1,4-GalT V遺伝子の発現も1/3に低下していた。一方、薬剤で処理した細胞ではβ-1,4-ガラクトース残基と結合するRCA-Iや高分岐糖鎖を認識するL-PHAとの反応性が、幾つかの糖タンパク質糖鎖で減少していた。以上の結果から、herbimycin Aを用いてβ-1,4-GalT V遺伝子の発現を抑制し、癌細胞の形質発現に関る糖鎖構造を制御できると考えられる。

This year's research and implementation plan is based on the research and implementation, and the following is the new knowledge and insights. 1)Last year's DNA からβ-1,4-GalT V 伝子の5'上水 basin (2.2kb) を Modulation し、これをホタルルシフェラーゼ伝子の上流に System いでプラスミドをした. Cancer cells (A549, SW480, 'K562, Molt -4) Introduce and measure the activity of β-1,4-GalT V 伝子 5' upper basin のプロモーターactive をreview価した.そのRESULTS, β-1,4-GalT V-プロモーターをcontaining むプラスミドを cells are introduced into the すると, and the にphoto is 6-200 times higher than the べてThe nature is the same as the DNA fragment, the DNA fragment is the activity, the activity is the activity, and the test is the test.さらに、β-1,4-GalT Vプロモーターから転WRITE FACTOR AP-1,c-Myb, Ets ファミリーが combines the する part をくと, SW480 においてプロモーターactivity の见られた. 2)β-1,4-GalT Vプロモーターには, srcチロシンキナーゼによってactivationされる転WRITE FACTORとcombinationするDomain existence することから、srcチロシンキナーゼの hindering であるherbimycin We analyzed the dynamics of β-1,4-GalT V residues and the presence or absence of changes in the sugar lock structure using A549 lung cancer cells. The quality of untreated cells was reduced, and the number of untreated cells was reduced. V's original appearance is 1/3 low. On the one hand, the β-1,4-ガラクトース residues in the cells treated with 薬扤 are bound to the RCA-I high The bifurcated sugar locks are known as the anti-reactive properties of L-PHA and the sugar locks of the low-quality sugars are reduced. The above results indicate that herbimycin A is inhibited by β-1,4-GalT V and the morphology and quality of cancer cells are controlled by sugar lock structure.