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抗生理活性物質抗体の構造解析と機能性ペプチド分子創生への応用

抗生理活性物质抗体的结构分析及其在功能性肽分子创建中的应用

基本信息

批准号：
10771315
负责人：
富岡佳久
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

抗生理活性物資抗体(抗グリチルレチン酸抗体、抗シガトキシン抗体)産生ハイブリドーマ細胞から抗体遺伝子をPCR法を用いてクローニングし、反応特異性に密接な可変部領域の塩基配列を決定し、それらの予測アミノ酸配列について遺伝子バンクに登録されている抗体と相同性について解析した。CDR1およびCDR2領域に関して、それぞれ高い相同性が認められたが、CDR3領域の配列に関して相同性の高い配列は認められなかった。これより、CDR3領域が特に抗体と抗原との反応特異性に寄与していることが示唆された。すなわち抗シガトキシン抗体に関して、シガトキシン1B(CTX1B)のABC環部を有機化学的に合成し、KLHとのコンジュゲートとして免疫、マウスモノクローナルを得た。反応特性性に関する検討から、CTX1Bの2位水酸基の立体が2R体と反応する6H7抗体と天然型2S体と反応する6F12抗体及び4H2抗体が得られていた。遺伝子解析から得られた各抗体の予測アミノ酸配列の比較により、6F12と4H2の重鎖領域配列の相同性が高く、可変領域内125アミノ酸残基中115残基(92%)が一致した。そこで、現在pComb3をベクターとしてCDR3領域をランダム化したファージディスプレイFab抗体ライブラリーを作製し、2S-ABC環ー牛血清アルブミン(BSA)コンジュゲートを用いてパンニングを行い、得られたファージクローンの解析を継続している。今後は、CDR1及びCDR2をランダム化した抗体ライブラリーを作製し、ハイブリドーマ法を代替するモノクローナル抗体作製法開発に応用する。

Anti-physiologically active resource antibodies (anti-TCA antibodies, anti-TCA antibodies) are produced by PCR. Antibody fragments are detected by PCR. Anti-TCA specificity is determined by binding to variable domain. Anti-TCA antibody fragments are detected by PCR. CDR1 and CDR2 domains are related to each other, CDR3 domains are related to each other, CDR3 domains are related to each other, CDR2 domains are related to each other, CDR3 domains are related to each other, and CDR3 domains are related to each other. CDR3 domain specific antibody and anti-specific antibody Antibodies are related to the synthesis of the ABC ring of CTX 1B(CTX1B), the synthesis of KLH and the synthesis of KLH. Anti-CTX-1B antibodies were found to be related to the 2-position amino acid group of CTX-1B, 6H7 antibodies, 6F12 antibodies, and 4H2 antibodies. In comparison of the predicted amino acid sequences of these antibodies, the similarity of the amino acid sequences of 6F12 and 4H2 was high, and 115 residues (92%) of 125 amino acid residues in the variable domain were identical. The CDR3 domain is now under control in pComb3, and the 2S-ABC ring is under control in BSA. The CDR3 domain is under control in BSA. In the future, CDR1 and CDR2 will be replaced by antibody production methods for development of antibody production methods.