新規がん抑制遺伝子DAN産物の機能解析

新型抑癌基因DAN产物的功能分析

• 批准号: 10780449
• 负责人: 中村 洋子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Chiba Cancer Center (Research Institute)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780449/
• 关键词: DAN蛋白質; 分泌; BMP2; P19; 神経芽細胞腫

細胞外に分泌されたDAN蛋白質がどのような分子機構を通して、細胞の増殖ならびにがん化を抑制するかについては不明であることから、DANの作用機構を解明する目的で研究を行っている。一昨年、DANはGremlin/Drm,CerberusとDANファミリーを形成するとともに、TGF-βスーパーファミリーの一つであるBMP2に抑制的に働き、アフリカツメガエルの初期発生における背側化因子となり得ることが報告された。(1)BMPの細胞内シグナル伝達は、その受容体およびSmadファミリーを介して行われることから、マウス胚性腫瘍細胞P19を用いてBMP2処理によるSmad1のリン酸化をウエスタンブロット法により検討した。その結果、P19細胞は、BMP2処理(0.01nM,30分)によりSmad1のリン酸化が起こることが判った。現在、DAN存在下でのBMP2処理によるSmad1のリン酸化抑制について検討中である。(2)GST/ラットDAN融合蛋白質を抗原としたマウス抗ラットDANモノクローナル抗体(1F8)を作成した。この抗体が、ヒトDANにも反応することを確認した。今後、血液中のDAN分泌量を測定するアッセイ系に使用可能と思われる。(3)ラット繊維芽細胞3Y1にラットDANを強制発現させた細胞、S9の培養上清よりラットDAN蛋白質の精製を行っている。方法は、硫安分画、Mono-Qカラム(FPLC)、1F8抗体アフィニティーカラムによる精製を検討中である。(4)神経芽細胞腫でのDAN,Gremlin,Cerberus,BMP2/4,BMPRIA,IB,IIのmRNA発現をノーザン法およびRT-PCR法により解析したところ、DANmRNAの発現量は、Gremlin,Cerberusのそれに比べ、有意に高かった。これら細胞ではBMP2,BMPRの発現も認められた。神経芽細胞腫でBMP2処理によるSmad1のリン酸化も検出され、これら細胞でのBMP2シグナル伝達におけるDANの関わりを解析中である。

The aim of this study is to clarify the molecular mechanism of extracellular DAN protein secretion, cell proliferation and inhibition, and the mechanism of DAN action. A year ago, DAN Gremlin/Drm,Cerberus and DAN were formed, TGF-β was formed, BMP2 was suppressed, and the initial development of DAN was reported. (1)BMP intracellular protein expression, protein expression, protein, protein expression, protein, protein, P19 cells were treated with BMP2 (0.01 nM, 30 min). Now, in the presence of DAN, BMP2 treatment can inhibit Smad1 acidification. (2)GST/DAN fusion protein antigen (1F8) was prepared. This antibody is a DAN. In the future, the amount of DAN secreted in the blood may be determined by the use of the system. (3)The purification of DAN protein in culture supernatant of 3Y1 cells and S9 cells under stress Methods: The purification of 1F8 antibody, Mono-Q antibody (FPLC), and sulfur antibody were studied. (4)mRNA expression of DAN,Gremlin,Cerberus,BMP2/4,BMPRIA,IB,II in neuroblastoma was analyzed by RT-PCR, DAN mRNA expression was analyzed by RT-PCR. BMP2,BMPR and BMPR were identified in the cells. BMP2-treated neurons contain Smad1 and DAN, which are related to BMP2-treated neurons.

项目成果

Nakamura,Y.,et al.: "Ectopic expression of DAN enhances the retinoic acid-induced neuronal differentiation in human neuroblastoma cell lines." Biochem.Biophys.Res.Comm.243. 733-726 (1998)

Nakamura,Y.,et al.：“DAN 的异位表达增强了视黄酸诱导的人神经母细胞瘤细胞系中的神经元分化。”

Hiwasa,T.,Nakamura,Y.,et al.: "Down-regulation of protein kinase C alfa and gamma and enhanced TPA-induced neurite formation in DAN-transfected neuroblastoma cells." FEBS Lett.440. 25-28 (1998)

Hiwasa,T.,Nakamura,Y.,et al.：“DAN 转染的神经母细胞瘤细胞中蛋白激酶 C alfa 和 gamma 的下调以及 TPA 诱导的神经突形成的增强。”

Shishikura T.,Nakamura Y.et al.: "Mutational analysis of the p73 gene in human breast cancers"Int.J.Cancer. 84. 321-325 (1999)

Shishikura T.、Nakamura Y.等人：“人类乳腺癌中 p73 基因的突变分析”Int.J.Cancer。

Ichimiya S.,Nakamura Y.et al.: "p73 at chromosome 1p36.3 is lost in advanced stage neuroblastoma but its mutation is infrequent"Oncogene. 18. 1061-1066 (1999)

Ichimiya S.、Nakamura Y.等人：“染色体1p36.3处的p73在晚期神经母细胞瘤中丢失，但其突变并不常见”癌基因。

Kuroiwa N.,Nakamura Y.et al.: "Regulation of the activity and polymerization status of recombinant human cytosolic thymidine kinase by thiols and ATP."Int.J.Oncology. 16. 305-313 (2000)

Kuroiwa N.、Nakamura Y.等人：“硫醇和 ATP 对重组人胞质胸苷激酶的活性和聚合状态的调节”。Int.J.Oncology。