神経伝達物質放出に関与する線虫UNC-18ファミリーの機能解析

线虫UNC-18家族参与神经递质释放的功能分析

基本信息

批准号：
10780484
负责人：
安藤恵子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

線虫ゲノム上に存在するunc-18類似遺伝子の構造と機能を明らかにする目的で本年度の研究実施計画に基づき(1)ゲノム上に同定された4つのアイソフォームのうちの1つのB0303.9についてcDNA塩基配列決定およびレポーターアッセイによる発現解析、(2)unc-18ファミリーの系統的逆遺伝学的解析のための高効率遺伝子破壊法の開発とミュータントバンクの作成を行った。(1)B0303.9全長cDNAクローンを得、塩基配列を決定した。B0303.9は603アミノ酸をコードすることが予測され、他生物種unc-18ファミリーと20%程度の相同性(同一アミノ酸)を示した。またB0303.9は腸管細胞、excretory canal細胞、CAN神経細胞等で発現が認められ、これらの分泌組織で働いていると考えられた。(2)線虫の逆遺伝学的解析法として化学変異原でゲノムに欠失変異を導入し、PCRで目的とする欠失変異体を選別する方法が適用されているが変異体分離の頻度が低いのが難点であった。そこでさまざまな条件検討を行い、従来法よりも高効率な方法を開発した(論文印刷中)。線虫凍結ミュータントバンクを作成し、パイロットスクリーニングを行ったところ、1つのアイソフォームC44C1.4の欠失変異体が得られた。さらにバンクサイズを大きくし、すべてのアイソフォームの欠失変異体を分離する予定である。

基于今年的研究实施计划，我们（1）使用cDNA碱基测序和报告基因测定和报告基因测试和（2）开发了一种高效的基因破坏方法，用于对UNC-18家族的系统反向遗传分析，使用cDNA碱基测序和记者进行了B0303.9（B0303.9）的cDNA测序和表达分析。（1）获得B0303.9全长cDNA克隆，并确定碱序列。预计B0303.9将编码603个氨基酸，并与其他生物体UNC-18家族显示约20％的同源性（相同氨基酸）。此外，B0303.9在肠细胞，排泄管细胞，CAN神经元等中表达，并被认为在这些分泌的组织中起作用。（2）一种对线虫的遗传分析的方法是使用化学诱变剂将缺失突变引入基因组中，并通过PCR选择靶标缺失突变体，但缺点是突变分离的频率较低。因此，检查了各种条件，并且一种比开发了常规方法更有效的方法（在印刷中）。创建了冷冻线虫突变库，并筛选了试点以获得一个同工型C44C1.4的缺失突变体。银行规模将增加，所有同工型的缺失突变体将被隔离。