線虫vps遺伝子群の網羅的遺伝子破壊によるリソソームの構築と輸送システムの解明

通过对线虫 vps 基因进行全面基因破坏来阐明溶酶体构建和运输系统

• 批准号: 16657060
• 负责人: 安藤 恵子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657060/
• 关键词: Caenorhabdisis elegans; リソソーム; 遺伝子破壊; vps遺伝子; 線虫; Caenorhabditis elegans; ノックアウト

酵母や培養細胞系などにより現在までに蓄積されているリソソーム/液胞系の知見を多細胞系で検証し、個体におけるリソソーム/液胞系のより高次な生理的意義を明らかにすることを目的として以下のような解析を行った。(1)線虫vps遺伝子のノックアウト変異体の分離液胞蛋白質輸送に関わる酵母変異体はvps遺伝子としてだけではなくさまざまな遺伝学的スクリーニングで同定されており、pep、vamなどについてもスクリーニングの対象にした。また、酵母では変異体として同定されていないが輸送系で重要な蛋白質ドメインをもつものに関してもスクリーニングの対象にした。変異体の分離は欠失変異をランダムに導入し目的とする欠失変異をPCRでスクリーニングするTMP/UV法を用いた(Gengyo-Ando & Mitani,2000)。分離した変異体は以下の通りである。(A)Sec1/Munc18;VPS33ホモログ2アリル,VPS45ホモログ1アリル(B)Syntaxin ; PEP12ホモログ3アリル,TLG2ホモログ1アリル,VAM3ホモログ1アリル(C)RabGTPase;RABホモログ15アリル(D)dynamin;VPS1ホモログ2アリル(E)VPS9ホモログ3アリル(F)PEP3/VPS18ホモログ1アリル(G)VPS39/VAM6/VPS3ホモログ1アリル(H)retromoer;VPS26ホモログ1アリル(I)VPS54ホモログ2アリル(2)変異部位の同定と変異体の維持各変異体から欠失領域を含むPCRフラグメントを精製し、direct sequencing法で欠失領域を同定した。遺伝子のコード領域を数百〜2kb程度欠いた変異体が得られた。野生型株との戻し交配および致死変異体のバランサー導入を行った。(3)変異体の表現型と機能解析得られた変異体の半数以上がホモ接合体として維持不可能であり、vps遺伝子群の多くは動物個体の生存や発生に必須の遺伝子であると考えられた。さらに(A)および(B)の遺伝子変異体についてトフンスジェニックマーカーを用いた解析を行ったところ、ゴルジ体からリソソームへの輸送だけでは細胞膜からリソソームへのエンドサイトーシス経路にも輸送異常を示す変異体があることがわかった。本研究課題を遂行することにより、さまざまなvps遺伝子群の遺伝的に安定した株が得られ、トランスジェニック解析を駆使した各々の蛋白質の機能解析を行なうための基盤作りができたと考えられる。

Yeast や cultured cell line などによりNow までに accumulates されているリソソーム/ liquid cell line の知见をmultiple cell line で検证し, individual におけるリソソーム/ Liquid cell system のより高考なphysiological significance を明らかにすることをpurpose として下のようなanalytic を行った. (1) Nematode vps legacy 伝子のノックアウト変variant のseparation liquid cell protein transport に关わる yeast 変variant はvps legacy 伝子としてだけではなくさまざまな伝学的スクリーニングで同定されており, pep, vamなどについてもスクリーニングの対肖にした.また、Yeast では変variant として同定されていないがTransportation system でimportantな egg White matter ドメインをもつものに关してもスクリーニングの対 resembles にした. Isolation of allogeneic isolates and the purpose of importing them is different (Gengyo-Ando & Mitani, 2000). Separation of the different body and the following の通である. (A)Sec1/Munc18;VPS33ホモログ2アリル,VPS45ホモログ1アリル(B)Syntaxin; PEP12ホモログ3アリル,TLG2ホモログ1アリル,VAM3ホモログ1アリル(C)RabGTPase;RABホモログ1 5アリル(D)dynamin;VPS1ホモログ2アリル(E)VPS9ホモログ3アリル(F)PEP3/VPS18ホモログ1アリル(G)VPS39/VAM6/VPS3ホモログ1アリル(H)retromoer;VPS26ホモログ1アリル(I)VP S54 ホモログ2アリル (2) 変different parts of the same determination と変variant の maintain each 剉variant から lack of area をcontaining むPCR フラグメントを refined し, direct The sequencing method is still in the wrong field. The area of ​​​​the legacy is several hundred to 2kb, and the size of the file is different from the original one. The wild-type strain, との戻し, was mated with および, and the lethal variant, のバランサー, was introduced into を行った. (3) It is impossible to maintain more than half of the mutant mutants' phenotypes and functions by analyzing the mutant mutants' combined bodies.であり, vps 伝子群の多くはAnimal individual のsurvivalや発生に必の缝子であると考えられた.さらに(A)および(B)の伝子変variant についてトフンスジェニックマーカーを用いたanalytic を行ったところ、ゴルジ体からリTransmission of cell membranes The transmission abnormality of the Toshiro road indicates the abnormality of the alien body. The subject of this research is the success of the project.スジェニックanalytic を駆 make したeach 々のprotein の Functional analysis を行なうためのbasic work りができたと考えられる.

项目成果

Nematode chondroitin polymerizing factor showing cell-/organ-specific expression is indispensable for chondroitin synthesis and embryonic cell division

• DOI: 10.1074/jbc.m409615200
• 发表时间: 2004-12-17
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Izumikawa, T;Kitagawa, H;Sugahara, K
• 通讯作者: Sugahara, K

The Caenorhabditis elegants eularyotic initiation factor 5A homologue, IFF-1,is regulated for germ cell proliferation, gametogenesis and localization of the P-granule component PGL-1.

优雅秀丽隐杆线虫真核起始因子 5A 同源物 IFF-1 受生殖细胞增殖、配子发生和 P 颗粒成分 PGL-1 定位的调节。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Mechanism of Development 121.3
• 作者: Hanazawa M;Kawasaki I;Kunitomo H;Gengyo-Ando K;Bennett KL;Mitani S;Iino Y.
• 通讯作者: Iino Y.