バクテリオファージφX174スパイクタンパクとリポ多糖の相互作用解析

噬菌体φX174刺突蛋白与脂多糖的相互作用分析

• 批准号: 11760091
• 负责人: 稲垣 穣
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760091/
• 关键词: lipopolysaccharide; bacteriophageφX174; spike protein; receptor; binding analysis; histidine tagged-protein; lipopoplysaccharide

スパイクタンパク質Hの認識におけるリポ多糖重要部分構造の特定Hタンパク質と大腸菌C株由来のビオチン標識LPSの結合に対する非標識のLPSの競合的な阻害を観測して、種々のLPSの構造と親和性の相関を調べた。大腸菌C株のLPSの親和性を100%として、サルモネラRa(95%),サルモネラRc(15%),大腸菌J5RcP^+(3.2%),大腸菌F583Rd_2(1.3%)と計算された。糖鎖が短くなると親和性が低下し、Hタンパク質はLPSのR-コア糖鎖の非還元末端部分を強く認識する事が判った。スパイクタンパクGのリポ多糖との相互作用の解析Gタンパク質とLPSとの相互作用を酵素リンクプレートアッセイで検出したところ、ウイルスの宿主細菌由来のLPSと強く結合し、非宿主のLPSとは結合しないことが判った。Gタンパク質の蛍光強度はLPSと結合することにより減少した。蛍光滴定により大腸菌C株由来のLPSとの解離定数はK_dは0.87±0.08μMと計算され、Hタンパク質に較べて1オーダー結合が強いことが判った。スパイクタンパク質Hのリポ多糖の脱アシル化誘導体との結合解析円偏光二色性CDスペクトルによりHタンパク質はαヘリックス構造に富む事が判った。LPSと結合するとCDスペクトルが変化し、蛍光強度が著しく増大した。一方、LPSの脂肪酸を限定分解したO-脱アシルLPSでは弱い蛍光増大が見られたが、脂肪酸を全て切断したO,N-脱アシルLPSでは蛍光強度が減少し、Hタンパク質はLPSの脂質部分と相互作用してコンフォメーション変化を起こすと考えられた。

The relationship between the structural affinity of LPS and the identification of LPS in E. coli C strain was studied. LPS affinity of E. coli strain C was 100% and 95% respectively. LPS affinity of E. coli strain C was 15% respectively. LPS affinity of E. coli strain J5RcP^+ was 3.2% respectively. LPS affinity of E. coli strain F583Rd2 was 1.3% respectively. The low affinity of the carbohydrate chain and the strong recognition of the non-reducing terminal part of the R-chain of LPS Analysis of the interaction between LPS and LPS in host bacteria and LPS in non-host bacteria. The light intensity of the G-10 is reduced by the combination of LPS. The dissociation constant of LPS from Escherichia coli strain C was 0.87±0.08μM, and the dissociation constant of LPS from Escherichia coli strain C was 0.87±0.08μM. The structure of the polarized dichroic CD is characterized by the following: The light intensity of the lamp is increasing. On the one hand, the fatty acid of LPS is limited to decompose, O, N, LPS is weak and light intensity is increased. On the other hand, the fatty acid is completely cut off, O,N, LPS is weak and light intensity is decreased. On the other hand, the fatty acid of LPS is partially interacted with LPS.

项目成果

Minoru Inagaki: "Evaluation of specific binding of H protein of bacteriophage φX174 fused with maltose-binding protein toward receptor lipopolys accharides"Journal of Biochemistry, Molecular Biology, and Physics. 4・1. 59-64 (2000)

Minoru Inagaki：“与麦芽糖结合蛋白融合的噬菌体H蛋白对受体脂多糖的特异性结合的评估”生物化学、分子生物学和物理学杂志4·1（2000）。

Minoru Inagaki: "Recognition of receptor lipopolysaccharides by spike G protein of bacteriophage φX174"Bioscience Biotechnology and Biochemistry. 64・9. 1993-1997 (2000)

稻垣稔：“噬菌体φX174的刺突G蛋白对受体脂多糖的识别”《生物科学·生物技术与生物化学》1993-1997年（2000年）。

Minoru Inagaki: "Characterization of the binding of spike H protein of bacteriophage φX174 with receptor lipopolysaccharides"Journal of Biochemistry. 127・4. 577-583 (2000)

Minoru Inagaki：“噬菌体 φX174 的刺突 H 蛋白与受体脂多糖的结合的表征”生物化学杂志 127・4（2000）。

Minoru Inagaki: "Evaluation of spscific binding of H protein of bacteriophage φX174 fused with maltose-binding protein toward receptor lipopolysaccharides"Journal of Biochemistry,Molecular Biology,and Physics. 4・1. 59-64 (2000)

Minoru Inagaki：“与麦芽糖结合蛋白融合的噬菌体H蛋白对脂多糖受体的特异性结合的评估”生物化学、分子生物学和物理学杂志4·1（2000）。

Minoru Inagaki: "Characterization of the binding of spike H protein of bacteriophage φX174 with receptor lipopolysaccharides"Journal of Biochemistry. (印刷中). (2000)

Minoru Inagaki：“噬菌体 φX174 刺突 H 蛋白与受体脂多糖结合的表征”生物化学杂志（2000 年出版）。